ГОСТ 31486-2012
Группа С19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРЕМИКСЫ
Метод определения содержания витамина К
Premixes. Method for determination of vitamin К
МКС 65.120
Дата введения 2013-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (ОАО "ВНИИКП")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 41 от 23-24 мая 2012 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны | Код страны | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Азербайджан | AZ | Азгосстандарт |
Армения | AM | Минторгэкономразвития |
Кыргызстан | KG | Кыргызстандарт |
Российская Федерация | RU | Росстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2012 г. N 446-ст* межгосударственный стандарт ГОСТ 31486-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
______________
* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2012 г. N 466-ст. - .
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53027-2008
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе "Национальные стандарты".
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе "Национальные стандарты", а текст изменений - в информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе "Национальные стандарты"
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает фотометрический метод определения витамина К.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 12.1.019-2009, здесь и далее по тексту. - .
ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 1942-86 1,2-Дихлорэтан технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р ИСО 6497-2011, здесь и далее по тексту. - .
ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования
_______________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. - .
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Диапазоны измерений содержания витамина К и метрологические характеристики метода
Диапазоны измерений содержания витамина К и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности при вероятности 0,95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
Диапазон измерений, г/т | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) , % | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичное отклонение воспроизводимости) , % | Показатель точности (границы относительной погрешности) ±, % |
От 0 до 100 включ. | 4,8 | 7,1 | 14 |
Св. 100 до 500 " | 2,9 | 5,1 | 10 |
" 500 " 1000 " | 2,7 | 4,9 | 9,6 |
4 Требования техники безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.
4.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу.
4.3 При работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать резиновые перчатки.
5 Отбор и подготовка проб к выполнению анализа
5.1 Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.
Допускается отбирать пробы премиксов, упакованных в бумажные мешки, мешочным щупом с последующим заклеиванием отверстия.
5.2 Подготовка пробы к анализу - по [1].
6 Определение содержания витамина К
Сущность метода заключается в извлечении витамина К из исследуемой пробы этиловым спиртом, реэкстракции 1,2-Дихлорэтаном и фотометрировании продукта цветной реакции его с (2,4-Динитрофенил)-гидразином при длине волны 635 нм.
6.1 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,0001 г.
Фотоэлектроколориметр с рабочим спектральным диапазоном от 315 до 980 нм с основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1% или спектрофотометр типа СФ.
Аппарат для встряхивания жидкости типа АВУ-1.
Центрифуга лабораторная ЦЭ-2 с числом оборотов 3000 об./мин.
Баня водяная с регулятором нагрева.
Колбы конические К-2-(250)-(34, 40) ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1(2)-2-25(100) по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 2(3)-1(2)-2-0,5(1,0; 2,0; 5,0; 10; 25) по ГОСТ 29227.
Пипетки с одной меткой 1(2)-2-2(10, 20, 25, 50) по ГОСТ 29169.
Цилиндры 1(3)-50(100) по ГОСТ 1770.
Воронки лабораторные В-36(56, 75)-50(80, 110) ХС по ГОСТ 25336.
Воронки делительные ВД-1-250 ХС по ГОСТ 25336.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры "красная лента".
Аммиак водный по ГОСТ 3760.
(2,4-Динитрофенил)-гидразин.
Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья с объемной долей этилового спирта 96,0%-96,3%.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Витамин К менадион (2-метил-1,4-нафтохинон) фирмы Supelko
1,2-Дихлорэтан по ГОСТ 1942.
Натрий углекислый по ГОСТ 83, раствор с массовой долей углекислого натрия 10%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечания
1 Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
6.2 Подготовка к выполнению анализа
6.2.1 Приготовление раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина
80 мг (2,4-Динитрофенил)-гидразина, взвешенного с погрешностью не более ±0,01 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют при нагревании до 70 °С на водяной бане в 80 см этилового спирта по 6.1, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 см соляной кислоты (35%-38%) и доводят содержимое в колбе до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают.
6.2.2 Приготовление раствора этилового спирта с массовой долей 40%
В стеклянную емкость вносят 40 см этилового спирта, приливают 56 см дистиллированной воды, перемешивают.
6.2.3 Приготовление стандартного раствора витамина К
Навеску витамина К массой 10 мг, взвешенную с погрешностью не более ±0,1 мг, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, приливают до метки этиловый спирт с массовой долей 40% и тщательно перемешивают.
Затем 10 см полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят до метки этиловым спиртом с массовой долей 40% и перемешивают.
25 см полученного раствора отбирают в делительную воронку вместимостью 250 см, добавляют 50 см 1,2-Дихлорэтана, 20 см раствора углекислого натрия с массовой долей 10% и перемешивают в течение 0,5-1,0 мин. Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана (нижнюю), переносят в другую делительную воронку, добавляют 20 см дистиллированной воды и перемешивают в течение 0,5 мин. После перемешивания раствор снова отстаивают до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр. Получают стандартный раствор витамина К, в 1 см которого содержится 5 мкг витамина К. Раствор витамина К хранят в холодильнике при температуре от 4 °С до 6 °С.
6.2.4 Построение градуированного графика
В 10 мерных колб вместимостью по 25 см приливают стандартный раствор витамина К (см. 6.2.3) в объемах, указанных в таблице 2.
Таблица 2 - Растворы сравнения
Наименование показателя | Номера колб | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
Объем стандартного раствора, см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 3,0 | 4,0 | 5,0 | 6,0 | 7,0 | 8,0 | 9,0 |
Масса витамина К, мкг/25 см | 2,5 | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 | 35 | 40 | 45 |
В каждую из 10 колб приливают по 7,5 см раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина и помещают их в водяную баню одновременно с испытуемыми и контрольным растворами (см. 6.2.5) на 2 ч при температуре (70±2) °С, периодически перемешивая содержимое колб. После этого растворы в колбах охлаждают до комнатной температуры, приливают в каждую колбу по 7,5 см смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25% в объемном соотношении 1:1, перемешивают, доводят объемы в колбах до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают и измеряют оптические плотности растворов сравнения в порядке возрастания их концентраций на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625±25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора.
По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности растворов сравнения, на оси абсцисс - содержание витамина К, мкг/25 см раствора.
6.2.5 Приготовление контрольного раствора
5 см 1,2-Дихлорэтана отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см, приливают 7,5 см раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина. Колбу помещают в водяную баню одновременно с испытуемыми пробами и растворами сравнения, далее проводят ту же самую обработку, что и с испытуемой пробой по 6.3.2 и 6.3.3.
6.3 Проведение анализа
6.3.1 Навеску премикса массой от 5 до 10 г, взвешенную с погрешностью не более ±0,01 г, помещают в колбу вместимостью 250 см, приливают 100 см этилового спирта с массовой долей 40%, встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об./мин. Центрифугат фильтруют для устранения случайно оставшихся взвешенных частиц. Отбирают от 5 до 25 см фильтрата в зависимости от предполагаемого содержания витамина К в испытуемом образце премикса, в делительную воронку вместимостью 250 см приливают 50 см 1,2-Дихлорэтана и 20 см раствора углекислого натрия с массовой долей 10% и перемешивают в течение 0,5-1,0 мин.
Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана, в полном объеме переносят в другую делительную воронку, приливают в нее 20 см дистиллированной воды и перемешивают в течение 0,5 мин.
После этого раствору снова дают отстояться до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр.
6.3.2 5 см 1,2-Дихлорэтанового экстракта испытуемых проб отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см, приливают 7,5 см раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина (см. 6.2.1), колбу помещают в водяную баню и выдерживают ее 2 ч при температуре (70±2) °С, периодически перемешивая содержимое колбы.
6.3.3 По истечении указанного времени содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, приливают 7,5 см смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25% в объемном соотношении 1:1, доводят объем в колбе этиловым спиртом до метки, тщательно перемешивают и измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625±25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора (см. 6.2.5). Раствор готовят в день проведения анализа.
7 Обработка результатов анализа
7.1 Содержание витамина К в премиксе , г/т, вычисляют по формуле
, (1)
где - масса витамина К, найденная по градуировочному графику, мкг;
- объем спиртового экстракта, см;
- объем 1,2-Дихлорэтана, взятый для экстракции, см;
- коэффициент перевода микрограммов в граммы;
- масса навески премикса, г;
- объем фильтрата спиртового экстракта, взятый для экстрагирования 1,2-Дихлорэтаном, см;
- объем 1,2-Дихлорэтанового экстракта, взятый для окрашивания, см;
- коэффициент перевода граммов в тонны.
7.2 Вычисления выполняют с точностью до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.
8 Оформление результатов анализа
При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает допустимое 
(, , - результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое значение соответственно), то среднеарифметическое значение принимают за результат анализа. В противном случае получают еще два результата определений и вычисляют окончательный результат анализа пробы по [2] (подраздел 5.2).
Значения предела повторяемости и предела воспроизводимости приведены в таблице 3.
Таблица 3
Диапазон измерений, г/т | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений) , % | Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) , % |
От 0 до 100 включ. | 13 | 20 |
Св. 100 " 500 " | 8 | 14 |
" 500 " 1000 " | 8 | 14 |
По полученному результату анализа и значению относительной погрешности (см. таблицу 1) рассчитывают абсолютную погрешность по формуле
, (4)
где - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.
Результат анализа представляют в виде 
, %. Допускается представление результата в виде 
, %, где - значение характеристики погрешности результатов анализа, установленное при реализации методики в конкретной лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов анализа, при условии 
.
Библиография
[1] | ИСО 6498:1998* Корма для животных. Приготовление проб для испытания |
________________ * Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - . | |
[2] | ИСО 5725-6:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике |
Электронный текст документа
и сверен по:
, 2012