ГОСТ Р 54032-2010 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания бета-адреностимуляторов с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Текст ГОСТа

ГОСТ Р 54032-2010

Группа Н09
Н19
Н11

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения содержания бета-адреностимуляторов с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Food products, feeds, food raw materials. Method of determination of -agonists by gas chromatography with mass spectrometry detector

ОКС 65.120,

67.050

ОКСТУ 9101

9709

Дата введения 2012-01-01

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ "ВГНКИ"), Федеральным государственным учреждением "Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория" (ФГУ "ЦНМВЛ")

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 646-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на продукты пищевые в части мяса и мясных продуктов, включая мясо и продукты из мяса птицы, комбикорма и продовольственное сырье, и устанавливает метод газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (далее - ГХ-МС) для идентификации и количественного определения бета-адреностимуляторов.

Диапазон измерений - от 0,1 до 100,0 мкг/кг.

Примечание - Метод может быть использован для определения содержания бета-адреностимуляторов в физиологических жидкостях, шерсти и органах животных.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначение чистоты

ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия

ГОСТ 24147-80 Аммиак водный особой чистоты. Технические условия

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Идентификацию и количественное определение бета-адреностимуляторов методом ГХ-МС проводят с использованием стандартных образцов бета-адреностимуляторов.

Количественное определение бета-адреностимуляторов проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений относительно градуировочной зависимости, полученной при анализе градуировочных растворов известных соединений в аналогичных условиях.

4 Условия выполнения измерений

При определении содержания бета-адреностимуляторов в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:


- температура окружающего воздуха	от 10 °С до 30 °С;
- атмосферное давление	от 84 до 106 кПа;
- напряжение в электросети	(220±20) В;
- частота тока в электросети	от 49 до 51 Гц;
- относительная влажность воздуха	от 30% до 80%.

Хроматографические измерения проводят в условиях, указанных инструкцией по эксплуатации соответствующего прибора.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

5.1 Для определения содержания бета-адреностимуляторов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы:

- хромато-масс-спектрометр, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 45 до 650 атомных единиц массы (а.е.м.), с разрешением по шкале масс не более 1,0 а.е.м. и чувствительностью в режиме ионизации электронным ударом: при инжекции в колонку 2 пг гексахлорбензола (сканирование в диапазоне от 45 до 350 а.е.м. за 1 с) отношение сигнал/шум на молекулярном ионе с m/z 284 не менее 10/1;

- колонку кварцевую капиллярную 30 м0,25 мм0,25 мкм с индексом полярности неподвижной жидкой фазы от пяти до 30;

- компьютер с установленным программным обеспечением для управления хромато-масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

- автосамплер для газового хроматографа;

- пипетки одноканальные переменного объема 10-100 мм, 40-200 мм, 200-1000 мм, 1-5 см с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу не более 2% (Transferpettor Brand, Германия)*;

_______________

* Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

- весы класса точности I и класса точности II с дискретностью отсчета 0,01 мг, поверочным делением по ГОСТ Р 53228;

- модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 250 °С;

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

- гомогенизатор лабораторный конфигурации ротор-статор;

- испаритель ротационный со скоростью вращения от 20 до 280 об/мин и температурным диапазоном нагревательной бани от 30 °С до 100 °С;

- центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения ротора не менее 3500 об/с и диапазоном рабочих температур от минус 10 °С до плюс 25 °С, с адаптерами для пробирок вместимостью 15, 50 см и микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 см;

- картридж для твердофазной экстракции объемом не менее 6 см, заполненный обращенно-фазным сорбентом С18 с размером диаметра частиц не более 50 мкм;

- устройство вакуумное для твердофазной экстракции;

- флаконы стеклянные вместимостью 4 см с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками;

- флаконы стеклянные вместимостью 40 см с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками;

- флаконы стеклянные вместимостью 2 см с завинчивающимися крышками, тефлоновыми прокладками и вставками объемом 100 мм;

- колбы мерные стеклянные 2-10-2, 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770;

- колбы стеклянные П-2-100-32 ТС по ГОСТ 25336;

- баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 кГц и объемом не менее 1 дм;

- шейкер вортексного типа движения, с амплитудой встряхивания 5 мм;

- шейкер орбитального типа движения с максимальной скоростью вращения 1000 об/мин;

- рН-метр с набором электродов с пределами абсолютной погрешности измерений ±0,01 ед. рН;

- фильтры мембранные с размером диаметра пор не более 0,45 мкм;

- шкаф сушильный лабораторный с автоматическим регулированием температуры в рабочем пространстве от 25 °С до 300 °С.

5.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы и материалы:

- гелий газообразный (сжатый) высокой чистоты, марка 6.0;

- азот газообразный особой чистоты по ГОСТ 9293;

- фермент протеолитический Subtilisine A (Sigma, Германия, N Р-5380)*;

_______________

- кислоту уксусную по ГОСТ 61, х.ч.;

- кислоту соляную по ГОСТ 3118, х.ч.;

- кислоту хлорную 65%-ную, х.ч.;

- кальций хлористый двухводный, х.ч.;

- аммиак водный по ГОСТ 24147, ос.ч.;

- кислоту метилборную, х.ч.;

- N-метил-N-триметилсилил-трифторацетамид (МСТФА) (Sigma, Германия, N М-7891)*;

- триметилйодсилан (ТМИС) (Aldrich, Германия, N 19,552-9)*;

_______________

- дитиоэритритол (ДТЭ), х.ч.;

- N,N-бис-триметилсилил-трифторацетамид (БСТФА) (Sigma, Германия, N Т-5634)*;

_______________

- триметилхлорсилан (ТМХС) (Sigma, Германия, N Т-4252)*;

_______________

- эфир метил-третбутиловый для хроматографии;

- н-Гексан х.ч.;

- калия гидроокись по ГОСТ 24363, х.ч.;

- натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.;

- метанол-яд по ГОСТ 6995;

- этанол абсолютный, х.ч.;

- сок пищеварительный Helix pomatia (Merck, Германия, N 1.04114)*;

_______________

- воду деионизованную;

- спирт изопропиловый по ГОСТ 9805, ос.ч.;

- эфир этиловый уксусной кислоты по ГОСТ 22300, х.ч.;

- сорбент Bondesil C18 40 мкм (Varian, США, N 12213012)*;

_______________

- твин 20 (Sigma, Германия, N Р-2287)*;

_______________

- натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.;

- калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198;

- натрий уксуснокислый, х.ч.;

- трис(гидроксиметил)-аминометан, х.ч.

Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2, х.ч. или 3, ч.д.а. по ГОСТ 13867.

5.3 Для определения содержания бета-адреностимуляторов применяют следующие стандартные образцы:

- цимбутерол-d9 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT*, Wageningen UR)**;

_______________

* Институт пищевой безопасности, расположенный в Нидерландах.

** Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

- цимбутерол массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR)*;

_______________

- кленбутерол-d6 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR)*;

_______________

- кленбутерол массовой долей основного вещества не менее 99,0% (Boehringer, Ingelheim)*;

_______________

- сальбутамол-d6 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR)*;

_______________

- сальбутамол массовой долей основного вещества не менее 98,0% (SIGMA, Deisenhofen)*;

_______________

- мапентерол массовой долей основного вещества не менее 99,0% (RIKILT, Wageningen UR)*;

_______________

- мапентерол-d11 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR)*;

_______________

- тербуталин массовой долей основного вещества не менее 99,0% (SIGMA, Deisenhofen)*;

_______________

- тербуталин-d9 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR)*;

_______________

- стандартные образцы с аттестованной массовой долей кленбутерола и сальбутамола:

1) лиофилизованная моча (IRMM*, BCR-504)**;

_______________

* Институт референтных материалов и измерений, расположенный в Бельгии.

2) лиофилизованная печень, чистый образец (IRMM, BCR-648)*;

_______________

3) лиофилизованная печень (IRMM, BCR-649)*.

_______________

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1 Приготовление растворов

6.1.1 Приготовление трис-буфера молярной концентрации 0,2 моль/дм и рН 8,0

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 24,2 г трис(гидроксиметил)-аминометана и 14,7 г кальция хлористого двухводного, растворяют в 800 см деионизованной воды, измеряют рН, доводят значение рН до (8,0±0,1) соляной кислотой молярной концентрации 1 моль/дм (5.2) и доводят объем раствора до метки деионизованной водой.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 4 °С - не более 1 мес.

6.1.2 Приготовление фосфатного буферного раствора молярной концентрации 0,1 моль/дм и рН 5,0

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 13,6 г калия фосфорнокислого однозамещенного, растворяют в 900 см деионизованной воды, измеряют рН, доводят значение рН до (5,0±0,1) соляной кислотой молярной концентрации 1 моль/дм (5.2) и доводят объем до метки деионизованной водой.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 4 °С - не более 3 мес.

6.1.3 Приготовление фосфатного буферного раствора молярной концентрации 0,1 моль/дм и рН 6,0

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 13,6 г калия фосфорнокислого однозамещенного, растворяют в 900 см деионизованной воды, измеряют рН, доводят значение рН до (6,0±0,1) соляной кислотой молярной концентрации 1 моль/дм(5.2) и доводят объем до метки деионизованной водой.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 4 °С - не более 3 мес.

6.1.4 Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0,2 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 16,4 г натрия уксуснокислого, растворяют в 900 см деионизованной воды, измеряют рН, доводят значение рН до (5,0±0,1) концентрированной уксусной кислотой и доводят объем раствора до метки деионизованной водой.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 4 °С - не более 1 мес.

6.1.5 Приготовление растворов для дериватизации

Для приготовления раствора МСТФА/ТМИС/ДТЭ смешивают 1000 мм МСТФА и 5 мм ТМИС во флаконе вместимостью 2 см, добавляют к полученному раствору 2 мг ДТЭ.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 4 °С - не более 1 недели.

Для приготовления раствора БСТФА/ТМХС смешивают 1000 мм БСТФА и 10 ммТМХС во флаконе вместимостью 2 см.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 4 °С - не более 1 недели.

6.1.6 Приготовление раствора аммиака в изопропиловом спирте

Во флакон вместимостью 40 см вносят 15 см изопропилового спирта, приливают 0,45 см аммиака и помещают раствор на 1 мин на ультразвуковую баню.

Раствор используют свежеприготовленным.

6.1.7 Приготовление раствора этилового эфира уксусной кислоты и метилборной кислоты

Для приготовления раствора смешивают 0,02 см метилборной кислоты и 10 см этилового эфира уксусной кислоты в мерной колбе вместимостью 10 см.

Раствор используют свежеприготовленным.

6.1.8 Приготовление раствора гидроокиси калия молярной концентрации 1 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 56,1 г гидроокиси калия, растворяют в 900 см деионизованной воды и доводят объем раствора до метки деионизованной водой.