ГОСТ 8756.22-80
Группа Н59
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ
Метод определения каротина
Fruit and vegetable products. Method for determination of carotene
МКС 67.080.01
OKCTУ 9109
Дата введения 1981-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Министерством пищевой промышленности СССР
РАЗРАБОТЧИКИ
Г.М.Евстигнеев; З.В.Левина, канд. техн. наук; А.И.Любивая; Е.И.Чадина
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 06.03.80 N 1034
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 6519-88
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер пункта |
ГОСТ 1012-72 | 2.1 |
ГОСТ 1770-74 | 2.1 |
ГОСТ 2603-79 | 2.1 |
ГОСТ 4166-76 | 2.1 |
ГОСТ 4220-75 | 2.1 |
ГОСТ 4526-75 | 2.1 |
ГОСТ 5556-81 | 2.1 |
ГОСТ 5962-67 | 2.1 |
ГОСТ 6709-72 | 2.1 |
ГОСТ 7031-75 | 2.1 |
ГОСТ 9147-80 | 2.1 |
ГОСТ 12026-76 | 2.1 |
ГОСТ 21400-75 | 2.1 |
ГОСТ 24104-88 | 2.1 |
ГОСТ 25336-82 | 2.1 |
ГОСТ 26313-84 | 1.1 |
ГОСТ 26671-85 | 1.1 |
6. Ограничение срока действия снято по протоколу N 5-94 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11-12-94)
7. ИЗДАНИЕ (апрель 2010 г.) с Изменениями N 1, 2, утвержденными в июле 1985 г., ноябре 1989 г. (ИУС 10-85, 2-90)
Настоящий стандарт распространяется на плодоовощные консервированные продукты и устанавливает метод определения каротина.
Метод основан на фотометрическом определении массовой концентрации каротина в растворе, полученном после экстрагирования каротина из продуктов органическим растворителем и очищенном от сопутствующих красящих веществ с помощью колоночной хроматографии. Нижний предел определения 0,1 мкг/см.
1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
1.1. Отбор проб и подготовка их к испытаниям - по ГОСТ 26313 и ГОСТ 26671.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
2. АППАРАТУРА, РЕАКТИВЫ, МАТЕРИАЛЫ
2.1. Для проведения испытания используют следующие аппаратуру, реактивы и материалы:
- фотоэлектроколориметр или спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны 450 нм и абсолютной погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1%;
- весы лабораторные по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г, с поверочной ценой деления 2,0 мг;
- весы лабораторные по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 500 г, с поверочной ценой деления 5,0 мг;
________________
* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001. С 1 января 2010 г. на территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
- электрошкаф сушильный лабораторный с диапазоном нагрева от 40 до 200 °С, обеспечивающий поддержание заданной температуры в пределах ±5 °С;
- испаритель ротационный ИР-IМ;
- насос водоструйный по ГОСТ 25336 или насос Комовского;
- колбы с тубусом для фильтрования под вакуумом по ГОСТ 25336, вместимостью 250 или 500 см;
- ступку фарфоровую по ГОСТ 9147;
- фильтры стеклянные по ГОСТ 25336;
- воронки диаметром 36 или 56 мм и воронки делительные цилиндрические, вместимостью 100 или 200 см по ГОСТ 25336;
- палочки стеклянные по ГОСТ 21400;
- стаканы типов В и Н по ГОСТ 25336, вместимостью 50 см;
- колбы мерные II класса по ГОСТ 1770, вместимостью 25, 50 и 100 см;
- пипетки по НТД, вместимостью 1, 5 см и 10 см;
- трубка стеклянная для хроматографической колонки длиной 200-250 мм, диаметром широкого конца 15 мм, суженного - 5 мм;
- пробирки типов П1 и П2 по ГОСТ 25336;
- эксикатор по ГОСТ 25336;
- ацетон по ГОСТ 2603;
- эфир петролейный или бензин авиационный по ГОСТ 1012 с температурой кипения 70-90 °С, или гексан;
- натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, прокаленный в течение 1 ч, при 100 °С;
- алюминия окись безводная, ч.д.а., для хроматографии, размер частиц (86±5) мкм, нейтральная, или окись алюминия по Брокману II, нейтральная;
- магния окись по ГОСТ 4526;
- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
- калия гидроокись, х.ч., раствор с массовой долей 50%; раствор с массовой долей 10% в этиловом спирте, свежеприготовленный;
- -каротин, стандартный раствор или азобензол, ч.д.а., или калия бихромат, х.ч. по ГОСТ 4220;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
- песок кварцевый по ГОСТ 7031, прокаленный;
- вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;
- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;
- эфир этиловый;
- кислоту аскорбиновую;
- фенолфталеин, раствор с массовой долей 1% в этиловом спирте.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Приготовление стандартного раствора
10 мг кристаллического каротина растворяют в гексане в мерной колбе вместимостью 100 см и доводят до метки растворителем. Перед построением градуировочного графика готовят рабочий раствор следующим образом: 1 см стандартного раствора разбавляют до 100 см гексаном; 1 см такого раствора содержит 1 мкг каротина;
или 14,5 мг азобензола, перекристаллизованного из спиртового раствора, растворяют в 50 см этилового спирта и доводят объем до 100 см; 1 см такого раствора по окраске соответствует 2,35 мкг каротина в 1 см;
или 36 мг бихромата калия растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 см и доводят объем до метки; 1 см такого раствора по окраске соответствует 2,08 мкг -каротина в 1 см.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
3.2. Приготовление адсорбента
Порцию окиси алюминия (или магния) высушивают в течение 60 мин при температуре 180 °С. Добавляют 1% дистиллированной воды, встряхивают до получения однородной массы в закрытой банке. В случае плохого разделения, адсорбент не увлажняют и используют сразу после высушивания.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.3. Приготовление адсорбционной колонки
В нижнюю часть стеклянной трубки для хроматографической колонки, вставленной в пробку, помещают небольшой кусочек ваты. Трубку наполняют окисью алюминия или окисью магния на высоту 5-7 см. В качестве обезвоживающего вещества сверху насыпают безводный сернокислый натрий высотой слоя 2 см. Трубку вставляют в колбу для отсасывания и смачивают растворителем, используемым для экстракции каротина.
3.4. Построение градуировочного графика
Готовят серию растворов сравнения. Для этого в ряд пробирок наливают 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 см свежеприготовленного рабочего раствора каротина и доводят объем растворов до 10 см гексаном. Полученные растворы содержат соответственно 0,10; 0,15; 0,20; 0,25; 0,30; 0,35; 0,40 мкг каротина в 1 см. Измеряют на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре оптическую плотность полученных растворов по отношению к гексану в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 1 см при длине волны 450 нм. Строят график зависимости оптической плотности раствора от массовой концентрации каротина (мкг/см) 
.
При отсутствии кристаллического каротина градуировочный график строят, используя стандартный раствор азобензола или бихромата калия. При использовании азобензола оптическую плотность растворов сравнения измеряют по отношению к спирту, а бихромата калия по отношению к воде при длине волны 450 нм.
Построение градуировочного графика повторяют не реже одного раза в 6 мес.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. Экстракция каротина
Из пробы консервированного продукта берут в ступку навеску массой 1-3 г (в зависимости от предполагаемого содержания каротина) с погрешностью не более ±0,01 г. Растирают в ступке с равным количеством кварцевого песка и 5-7 см ацетона. Ацетоновую вытяжку, не затрагивая осадка, фильтруют в делительную воронку через стеклянный фильтр. Экстракцию проводят до обесцвечивания последней порции ацетона. Ацетоновый фильтрат встряхивают в делительной воронке с 15 см второго экстрагента, в качестве которого используют петролейный эфир, бензин или гексан. Каротин переходит из нижнего ацетонового в верхний слой второго экстрагента. Если после встряхивания слои полностью не разделяются, добавляют 1-2 см воды. После разделения слоев нижний водоацетоновый слой отбрасывают, а верхний слой промывают водой до полного удаления ацетона.
Жидкие продукты (соки, сиропы) в количестве 10,0-20,0 г сразу вносят в делительную воронку с 20 см ацетона. Экстракт встряхивают в делительной воронке и добавляют 15 см гексана. Встряхивают осторожно во избежание образования эмульсии.
В продуктах, содержащих жир свыше 5%, проводят горячее омыление жира. Пробу продукта, растертую с песком, помещают в круглодонную колбу с обратным холодильником, добавляют около 1 г аскорбиновой кислоты и 30 см раствора гидроокиси калия в этиловом спирте. Смесь доводят до кипения на водяной бане и выдерживают в течение 30 мин. После охлаждения содержимое количественно переносят в делительную воронку, ополаскивая колбу 20 см воды. Затем экстрагируют каротин путем добавления гексана (бензина, петролейного эфира) порциями по 5-7 см при встряхивании до обесцвечивания последней порции. Собирают экстракты в другую делительную воронку и промывают водой до отсутствия щелочной реакции по фенолфталеину, тщательно сливая воду.
4.2. Очистка экстракта каротина
Экстракт каротина, полученный по п.4.1, пропускают через адсорбционную колонку со скоростью 1,0-1,5 см в минуту. Колонку промывают растворителем, используемым для второй экстракции до тех пор, пока не начнет выходить бесцветный элюат. На колонке остаются красящие вещества, адсорбционная способность которых выше, чем у каротина. Элюат каротина переносят в мерную колбу на 25 или 50 см, доводят до метки растворителем и определяют в нем концентрацию каротина на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине волны 450 нм.
В случае неотделения -каротина в растворитель добавляют 1-2% ацетона.
При анализе продуктов из моркови и моркови в смеси с компонентами, не содержащими -каротин, очистку экстракта на колонке не производят.
4.1, 4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
4.3. Определение массовой концентрации каротина
Измеряют оптическую плотность исследуемого раствора на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине волны 450 нм, в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм против чистого растворителя.
По градуировочному графику находят массовую концентрацию каротина (мкг/см). Если оптическая плотность исследуемого раствора превышает 0,45, делают соответствующее разведение.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Массовую долю каротина () в процентах вычисляют по формуле
,
где - массовая концентрация каротина, определенная по градуировочному графику, мкг/см;
- объем элюата каротина (п.4.2), см;
- масса навески продукта, г.
Вычисления единичных измерений проводят до пятого десятичного знака.
5.2. За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, если расхождение между ними не превышает 0,4·10% при массовой доле каротина не более 5·10 и 1·10% при массовой доле каротина более 5·10% (=0,95).
(Измененная редакция, Изм. N 1).
Электронный текст документа
и сверен по:
издание официальное
Продукты переработки плодов и овощей.
Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: Стандартинформ, 2010