ГОСТ Р 51469-99
Группа Н19
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
КАЗЕИНЫ И КАЗЕИНАТЫ
Фотометрический метод определения массовой доли лактозы
Caseins and caseinates.
Photometric method for determination of lactose content
ОКС 67.100.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 2001-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ)
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты"
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 года N 624-ст
3 Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 5548-80* "Казеины и казеинаты. Определение содержания лактозы. Фотометрический метод"
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт . - .
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2011 г.
1 Область применения
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на казеины и казеинаты массовой долей углеводов не более 2%. Стандарт устанавливает фотометрический метод определения массовой доли лактозы и других растворимых углеводов.
Метод основан на растворении навески продукта в горячей воде или растворе, осаждении осадка фильтрации, окраске безбелкового осадка углеводов, фотометрического измерения и определения массовой доли лактозы в соответствии с калибровочным графиком.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 199-78 Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 6859-72 Приборы для отмеривания и отбора жидкостей. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия
ГОСТ 23519-93 Фенол синтетический технический. Технические условия
ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
__________________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1
ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования
ИСО 707-97* Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб
_______________
* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе соответствующего ИСО. С 11 августа 2008 г. действует ИСО 707:2008.
3 Определение
В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:
массовая доля лактозы в казеинах и казеинатах: Отношение массы растворимых углеводов к массе навески продукта, умноженное на 100.
4 Аппаратура, материалы и реактивы
Дозаторы серной кислоты по ГОСТ 6859 вместимостью 10 см.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104, 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и ценой поверочного деления 0,001 г.
Устройство измельчающее, без нагрева пробы при измельчении и без потери или поглощения влаги.
Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 100 и 500 см.
Сито из проволочной сетки диаметром 200 мм, размером стороны ячейки 500 мкм.
Пробирки с притертыми пробками по ГОСТ 1770 вместимостью 40 см.
Пипетки по ГОСТ 29227 исполнения 2, 1-го и 2-го класса точности, вместимостью 1, 2 и 10 см.
Микропипетки вместимостью 0,2 см и ценой деления 0,001 см.
Баня водяная с возможностью установки температур (20±1) °С и от 60 °С до 70 °С.
Цилиндры мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 25 см.
Фотоэлектроколориметр диапазоном измерения при длине волны 490 нм, с кюветами размером оптического пути от 1 до 2 см.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Натрий углекислый кислый (NaHCO) по ГОСТ 4201, ч.д.а.
Натрия трифосфат (NaРО) по технической документации, ч.д.а.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор концентрации 0,1 моль/дм, х.ч.
Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, плотностью 1,84 г/см, раствор концентрации 1 моль/дм, х.ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, раствор 100 г уксусной кислоты в 1 дм дистиллированной воды, х.ч.
Натрий уксуснокислый (CHCOONa) по ГОСТ 199, раствор концентрации 1 моль/дм, ч.д.а.
Фенол по ГОСТ 23519, раствор с массовой долей фенола 80%.
Лактоза безводная, ч.д.а.
Кислота уксусная синтетическая и регенерированная по ГОСТ 19814.
Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.
5 Отбор проб
Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций - по ИСО 707.
6 Подготовка к определению
6.1 Подготовка пробы
6.1.1 В колбу вместимостью 250 см помещают (50±1) г казеина или казеината, закрывают колбу пробкой и перемешивают пробу десятикратным переворачиванием и встряхиванием колбы.
6.1.2 Тщательно перемешанную пробу переносят на лабораторное сито.
6.1.3 Если 50 г пробы полностью просеивается через сито, проба пригодна для дальнейшей работы.
6.1.4 Если проба полностью или частично не проходит, измельчают (50±5) г образца. Пробу просеивают и переносят в колбу вместимостью 250 см, закрывают пробкой и тщательно перемешивают не менее чем десятикратным переворачиванием колбы. Во время проведения этих работ необходимо исключить попадание влаги в продукт и дальнейшее определение проводить как можно скорее.
6.2 Приготовление растворов для построения калибровочного графика
6.2.1 Раствор лактозы
В мерную колбу вместимостью 100 см помещают (2,000±0,001) г безводной лактозы, доливают дистиллированной водой до метки и перемешивают до полного растворения. Раствор хранят при температуре 0 °С.
6.2.2 Приготовление градуированных растворов
6.2.2.1 Раствор А
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 10 см раствора лактозы (по 6.2.1) и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора А содержится 2 мг безводной лактозы.
6.2.2.2 Раствор N 1
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 1 см раствора А и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора содержится 20 мкг безводной лактозы.
6.2.2.3 Раствор N 2
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 2 см раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора содержится 40 мкг безводной лактозы.
6.2.2.4 Раствор N 3
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 3 см раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора содержится 60 мкг безводной лактозы.
6.2.2.5 Раствор сравнения
В колбу вместимостью 100 см вносят (0,100±0,001) г углекислого кислого натрия для кислотного казеина или (0,100±0,001) г трифосфата натрия - для сычужного казеина и доливают 25 см дистиллированной воды. Перемешивают встряхиванием и ставят на водяную баню при температуре (65±5) °С до полного растворения. Далее обработка раствора по 6.3.4.
6.3 Подготовка фильтрата в соответствии с требованиями, изложенными в приложении А
6.3.1 Навеску массой (1,00±0,01) г казеина или казеината по 6.1 помещают в коническую колбу вместимостью 100 см и добавляют (кроме казеината):
- для кислотного казеина - (0,100±0,001) г углекислого кислого натрия (NaHCO);
- для сычужного казеина - (0,100±0,001) г трифосфата натрия (NaHO).
6.3.2 В колбу доливают 25 см дистиллированной воды, ставят на водяную баню температурой от 60 до 70 °С. Колбу периодически перемешивают встряхиванием.
6.3.3 Нагревание проводят в течение 10-15 мин до полного растворения навески.
6.3.4 Колбу охлаждают до комнатной температуры и постепенно добавляют:
- 15 см дистиллированной воды и перемешивают встряхиванием;
- 8 см раствора соляной кислоты или раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм и перемешивают встряхиванием;
- 1 см раствора уксусной кислоты и перемешивают встряхиванием.
Колбу оставляют на 5 мин.
Затем добавляют 1 см раствора ацетата натрия и перемешивают встряхиванием.
Колбу оставляют до полного осаждения казеинового преципитата.
Раствор фильтруют через сухую фильтровальную бумагу.
7 Проведение определения
7.1 В пробирку вместимостью 40 см отмеряют пипеткой 2 см фильтрата, добавляют микропипеткой 0,2 см раствора фенола массовой долей 80% и перемешивают встряхиванием.
Доливают концентрированную серную кислоту при помощи дозатора со скоростью 5 см/с. Струю кислоты направляют на поверхность раствора, а не по стенке пробирки, при этом хорошо перемешивают.
Содержимое пробирки вновь тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют в покое на 15 мин.
Охлаждают в течение 5 мин на водяной бане при температуре (20±2) °С и приступают к измерению.
Измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 490 нм с использованием раствора сравнения, приготовленного по 6.2.2.5.
Если значение оптической плотности выше верхнего предела, указанного калибровочной кривой, повторяют измерение с использованием 2 см разбавленного раствора фильтрата вместо самого фильтрата.
Примечание - Если делается такое разбавление, то в формуле расчета по 8.1 проводят соответствующую корректировку.
7.2 Построение калибровочного графика
В четыре пробирки для анализа помещают 2 см каждого из трех градуировочных растворов по 6.2 и приливают к ним 2 см дистиллированной воды.
Измеряют оптическую плотность трех градуировочных растворов с использованием раствора сравнения, подготовленного по 6.2.2.5.
Строят калибровочный график нанесением значений массовой концентрации безводной лактозы и результатов измерения оптической плотности.
8 Обработка результатов
8.1 Массовую долю лактозы в навеске , %, вычисляют по формуле
,
где - массовая концентрация безводной лактозы, определенная по градуировочному графику, мкг/см;
- масса навески продукта, г;
- объем раствора казеина или казеината, см.
9 Метрологические характеристики
9.1 Сходимость
Разность двух результатов определений, полученных при анализе одной и той же пробы одним и тем же лаборантом за короткий промежуток времени, не должна превышать 0,03% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности =0,95.
9.2 Воспроизводимость
Разность двух единичных и независимых результатов определений, полученных двумя лаборантами, работающими в разных лабораториях с одной и той же пробой, не должна превышать 0,04% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности =0,95.
9.3 Если расхождение результатов двух параллельных определений (сходимость) превышает 0,03%, то повторно проводят два новых определения.
ПРИЛОЖЕНИЕ А (обязательное). Подготовка фильтрата
ПРИЛОЖЕНИЕ А
(обязательное)
Вид продукта | Масса навес- ки, г | Бикар- бонат натрия NaHCO | Пента- натрий- | Объем воды, см | Время выдерж- ки при нагре- вании, мин | Объем воды, см | Объем HCl HSO | Уксус- ная кис- лота, см | Время выдерж- ки, мин | Ацетат натрия CH COONa (см) |
Казеинаты | 1±0,01 | 25 | 10-15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | ||
Кислотные казеины | 1±0,01 | 0,1±0,001 | 25 | 10-15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | |
Сычужные казеины | 1±0,01 | 0,1±0,001 | 25 | 10-15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | |
Раствор сравнения для кислотного казеина | 0,1±0,001 | 25 | - | - | - | - | - | - | ||
Раствор сравнения для сычужного казеина | 0,1±0,001 | 25 | - | - | - | - | - | - |
Электронный текст документа
и сверен по:
официальное издание
Масла, сыры, казеины и казеинаты.
Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: Стандартинформ, 2011