ГОСТ 30627.3-98
Группа Н19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
Метод измерения массовой доли витамина Е (токоферола)
Infant milk products. Method for determination of mass part of vitamin E (Tocopheroli)
МКС 67.100.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 2000-05-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН МТК 186 и Научно-исследовательским институтом детского питания
ВНЕСЕН Госстандартом России
2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 12 ноября 1998 г. N 14)
За принятие проголосовали:
Наименование государства | Наименование национального органа по стандартизации |
Азербайджанская Республика | Азгосстандарт |
Республика Беларусь | Госстандарт Беларуси |
Грузия | Грузстандарт |
Киргизская Республика | Киргизстандарт |
Республика Молдова | Молдовастандарт |
Республика Таджикистан | Таджикгосстандарт |
Туркменистан | Главная Государственная инспекция Туркменистана |
Республика Узбекистан | Узгосстандарт |
Украина | Госстандарт Украины |
3 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. N 144 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.3-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания, обогащенные витамином Е (токоферолом), и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина Е.
Метод основан на реакции восстановления токоферолами трехвалентного железа в двухвалентное с образованием окрашенного комплекса двухвалентного железа с ортофенантролином (батофенантролином или , -дипиридилом).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 4147-74 Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа
ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов
ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов
ГОСТ 5962-67* Спирт этиловый ректификованный. Технические условия
__________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
ГОСТ 6552-80 Кислота ортофосфорная. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
_______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 24104-2001. - Примечание "КОДЕКС".
ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования
3 Методы отбора проб
Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.
4 Аппаратура, материалы и реактивы
Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °С с погрешностью ±2 °С.
Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Воронки делительные номинальной вместимостью 250 см по ГОСТ 25336.
Воронки стеклянные типа В диаметром 56 мм по ГОСТ 25336.
Испаритель ротационный ИР-1М [1].
Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 50, 100 см по ГОСТ 1770.
Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100 см по ГОСТ 25336.
Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2, 5, 10, 25 см по ГОСТ 29227.
Пробирки стеклянные типа П4 номинальной вместимостью 10 и 20 см по ГОСТ 25336.
Секундомер 2-го класса [2].
Стакан исполнения 3 номинальной вместимостью 1000 см по ГОСТ 9147.
Термометр жидкостный (не ртутный) диапазоном измерения 0-100 °С ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.
Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения 220-1100 нм [3] или колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения 200-2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания 100-1% [4].
Холодильник обратимый со шлифом и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.
Цилиндры исполнения 1 вместимостью 25, 50 см по ГОСТ 1770.
Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.
Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200 °С с погрешностью ±2 °С.
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.
Аскорбиновая кислота (витамин С) [5].
Батофенантролин , -дипиридил (4, 4-дипиридил) [6].
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Железо треххлористое 6-водное ч. по ГОСТ 4147.
Калия гидроокись х.ч. по ГОСТ 24363.
Натрий сернокислый безводный х.ч. по ГОСТ 4166.
Ортофенантролин [7].
Ортофосфорная кислота ч. по ГОСТ 6552.
Спирт абсолютный [8].
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Токоферола ацетат (витамин Е ацетат) [9] или масляный раствор массовой концентрации -токоферола ацетата 300 г/дм (с массовой долей -токоферола ацетата в масле 30%) [10].
Фенолфталеин ч.д.а. [11].
Эфир петролейный [12], перегнанный при температуре (50±10) °С, не содержащий перекисей.
Эфир этиловый по ГОСТ 8981.
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
Хранение растворов по ГОСТ 4212.
Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.
5 Условия выполнения измерения
Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете, в связи с разрушением витамина Е под воздействием ультрафиолетовых лучей.
Работу с эфиром необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.
6 Подготовка к выполнению измерения
6.1 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см
(0,200±0,001) г треххлористого железа, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
Раствор хранят в склянке из темного стекла при (6±2) °С.
6.2 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 0,25 мг/см
1,25 см раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см смешивают с 8,75 см абсолютного спирта и тщательно перемешивают.
Раствор готовят непосредственно перед применением.
6.3 Приготовление раствора молярной концентрации (HPO)=0,03 моль/дм в абсолютном спирте
(0,327±0,001) г ортофосфорной кислоты, взвешенной на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
6.4 Приготовление спиртового раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см
(0,100±0,001) г ортофенантролина, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
6.5 Приготовление спиртового раствора , -дипиридила (4, 4-дипиридила) массовой концентрации 5 мг/см
(0,500 ±0,001) г , -дипиридила, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
Спиртовые растворы ортофенантролина, батофенантролина и , -дипиридила хранят в склянке из темного стекла при (6±2)
°С.
6.6 Приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/см
(1,00±0,04) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 см этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 см, добавляют 30 см дистиллированной воды и перемешивают.
6.7 Приготовление водного раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см
(125,0±0,1) г гидроокиси калия, взвешенной на весах 4-го класса точности, растворяют в 100-150 см дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20±5) °С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
6.8 Обезвоживание сернокислого натрия
Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (150±10) °С 8-12 ч. Хранят в эксикаторе.
6.9 Приготовление стандартного раствора -токоферола
(0,040±0,001) г 100%-ного препарата витамина Е, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 50 см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см и доводят объем до метки этим же спиртом.
6.9.1 Гидролиз
В круглодонную колбу вместимостью 100 см вносят 5 см полученного по 6.9 стандартного раствора витамина, добавляют 15 см этилового спирта, (0,10±0,03) г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, 1 см гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см и перемешивают. Колбу соединяют с обратным водяным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (18±2) мин.
6.9.2 Экстракция
По окончании гидролиза содержимое колбы охлаждают до (20±5) °С и количественно переносят в делительную воронку. Колбу ополаскивают 50 см дистиллированной воды, воду сливают в ту же воронку.
Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути гидролиз повторяют, увеличивая при этом объем щелочи до 2 см или время гидролиза до (30±2) мин.
Неомыляемые вещества экстрагируют диэтиловым или петролейным эфиром три раза по 25 см. После чего нижний (водный) слой отбрасывают.
6.9.3 Промывка
Объединенный эфирный экстракт (верхний слой) переносят в делительную воронку и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 50-60 см дистиллированной воды.
Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20-30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. По окончании фильтрования фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 см.
6.9.4 Отгонка растворителя
Колбу с фильтратом подсоединяют к роторному испарителю и отгоняют эфир под вакуумом при температуре водяной бани не более 30 °С для диэтилового эфира и не более 50 °С - для петролейного эфира.
Неомыляемый остаток растворяют в абсолютном спирте и доводят объем до 100 см этим же спиртом.
Если используют препарат витамина Е другой концентрации, то навеску рассчитывают так, чтобы конечная концентрация стандартного раствора (после гидролиза) составляла не менее 20 мкг/см.
6.9.5 Проверка концентрации стандартного раствора -токоферола
В полученном растворе определяют массовую концентрацию -токоферола, измеряя оптическую плотность спиртового раствора при длине волны 292 нм.
Массовую концентрацию -токоферола , мкг/см вычисляют по формуле
, (1)
где - оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 292 нм против абсолютного спирта;
10000 - масса -токоферола в 1 см 1%-ного раствора, мкг;
- удельный показатель поглощения при длине волны 292 нм для 1%-ного раствора -токоферола в абсолютном спирте, равен 74,7.
6.9.6 Построение калибровочного графика
В пять пробирок вносят по 0,25; 0,5; 0,75; 1,0 см полученного стандартного раствора и доводят объем в каждой пробирке абсолютным спиртом до 5 см. В шестую пробирку вносят 5,0 см абсолютного спирта (холостая проба). Затем во все пробирки приливают по 0,5 см раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см, или , -дипиридила массовой концентрации 5 мг/см, добавляют 0,5 см раствора треххлористого железа массовой концентрации 0,25 мг/см, перемешивают и не более чем через 20 с добавляют 0,5 см раствора ортофосфорной кислоты молярной концентрации (HPO)=0,03 моль/дм и снова перемешивают. Реакцию проводят с каждой пробиркой отдельно.
Определяют оптическую плотность на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.
Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают массу -токоферола от 5 до 20 мкг, а по оси ординат - разность показаний прибора между испытуемым раствором и холостой пробой.
Построение калибровочного графика повторяют при смене прибора или одного из реактивов, необходимых для проведени
я реакции.
6.10 Щелочной гидролиз продукта
Для жидких и пастообразных продуктов отобранную для анализа пробу прогревают при 37 °С 20-30 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.
Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина Е в продукте.
Массовая доля витамина Е, млн | Навеска сухого продукта, г |
8,5-15 | 10,0±0,4 |
15-45 | 5,0±0,4 |
45-120 | 2,0±0,4 |
Навеска жидкого и пастообразного продукта - (15±0,01) г.
Навеску помещают в круглодонную колбу роторного испарителя вместимостью 100 см. К навеске для сухого продукта добавляют (9±1) см дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. В круглодонную колбу ротационного испарителя к навеске продукта добавляют 100-150 мг аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40 см этилового спирта и, перемешивая, вносят 5-7 см раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см.
Колбу соединяют с обратным холодильником и выдерживают при температуре кипения смеси на водяной бане в течение (30±1) мин.
6.11 Экстракция
Экстракцию и последующие операции проводят в соответствии с 6.9.2-6.9.4.
Эфирный экстракт помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 см. Эфир выпаривают на ротационном испарителе согласно 6.9.4, а сухой остаток немедленно растворяют в 15 см абсолютного спирта.
7 Проведение измерения
Оптическую плотность измеряют на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.
1,0-5,0 см полученного раствора (в зависимости от массовой доли витамина Е в продукте) помещают в пробирку, доводят объем раствора до 5 см абсолютным спиртом и перемешивают. Затем проводят реакцию согласно 6.9.6. Проводят параллельные измерения в двух пробирках и берут средний результат. В третьей пробирке готовят холостую пробу согласно 6.9.6.
8 Обработка результатов
Массовую долю витамина Е (токоферола) , млн, вычисляют по формуле
, (2)
где - масса витамина Е в анализируемом растворе продукта, установленная по калибровочному графику (по разнице показаний оптической плотности между анализируемым раствором и холостой пробой), мкг;
- общий объем анализируемого раствора в абсолютном спирте после экстракции, см;
- объем спиртового раствора, взятый на проведение цветной реакции, см;
- масса продукта, взятая на гидролиз, г.
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.
Относительная погрешность измерения массовой доли витамина Е - ±20% при доверительной вероятности =0,95.
Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 15% среднего арифметического значения результатов измерений.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднего арифметического значения результатов измерений.
ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)
Библиография
[1] | ТУ 25-11-917-76 Испаритель ротационный ИР-1М |
[2] | ТУ 25-1819.0021-90 Секундомеры механические "Слава" |
[3] | ТУ 3-3.2164-89 Фотометр фотоэлектрический КФК-3 |
[4] | ТУ 3-КРАЮ.414216.001-90 Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2Ц. |
[5] | ГФ СССР-X ст.6 Кислота аскорбиновая |
[6] | ТУ 6-09-15-139-86 Батофенантролин |
[7] | ТУ 8П-399-70 Ортофенантролин |
[8] | ТУ 18-3-2-76 Спирт абсолютный |
[9] | ГФ СССР-X ст.695 Токоферола ацетат (витамина Е ацетат) |
[10] | ВФС 42-1642 Раствор -токоферола ацетата 5, 10 или 30% в масле |
[11] | ТУ 6-09-5360-87 Фенолфталеин |
[12] | ТУ 6-02-1244-83 Эфир петролейный |
Текст документа сверен по:
Продукты молочные для детского питания.
Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: ИПК Издательство стандартов, 2001