ГОСТ 29177-91
Группа С19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ЗЕРНО
Методы определения состояния (степени деструкции) крахмала
Grain. Methods of determining the destruction grade of starch
MКC 67.060
ОКСТУ 9809
Дата введения 1993-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом комбикормовой промышленности
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 19.12.91 N 2008
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, | Номер раздела, пункта |
ГОСТ 61-75 | 2.1 |
ГОСТ 83-79 | 2.1 |
ГОСТ 1770-74 | 2.1, 3.1 |
ГОСТ 2080-76 | 2.1 |
ГОСТ 4165-78 | 2.1 |
ГОСТ 4204-77 | 2.1 |
ГОСТ 4220-75 | 2.1 |
ГОСТ 4232-74 | 2.1 |
ГОСТ 4328-77 | 2.1 |
ГОСТ 5845-79 | 2.1 |
ГОСТ 6709-72 | 2.1, 3.1 |
ГОСТ 10163-76 | 2.1 |
ГОСТ 12026-76 | 2.1 |
ГОСТ 13586.3-83 | 1 |
ГОСТ 20264.4-89 | 2.2.8 |
ГОСТ 23635-90 | 3.1 |
ГОСТ 24104-88 | 2.1 |
ГОСТ 25336-82 | 2.1, 3.1 |
ГОСТ 29227-91 | 2.1, 3.1 |
ГОСТ 29251-91 | 2.1, 3.1 |
ТУ 64-13-18 | 2.1, 3.1 |
5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2004 г.
Стандарт распространяется на необработанное зерно, а также на зерно, подвергнутое различным способам гидротермической обработки (микронизация, экструдирование, поджаривание и т.п.), и устанавливает метод определения деструкции крахмала.
1. ОТБОР ПРОБ
Отбор проб - по ГОСТ 13586.3.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ДЕСТРУКЦИИ КРАХМАЛА
(Основной метод)
Сущность метода заключается в определении степени гидролиза углеводного комплекса зерна с помощью фермента глюкоамилазы и определении глюкозы, получаемой в результате деструкции крахмала.
2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* 2-го класса точности с допускаемой погрешностью взвешивания ±0,01 г.
_____________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.
Мельница лабораторная электрическая.
Термостат биологический.
Плитка электрическая.
Пипетки исполнения 2; 2-го класса точности, вместимостью 1 см, 5 см, 20 см по ГОСТ 29227.
Пипетки градуированные по ГОСТ 29227 исполнений 1, 4, 7.
Колбы мерные исполнений 1, 2; вместимостью 100 см, 1000 см 2-го класса точности по ГОСТ 1770.
Стаканы химические по ГОСТ 25336.
Цилиндры исполнения 1 вместимостью 100, 250, 500 см по ГОСТ 1770.
Колбы мерные.
Колбы конические вместимостью 150 см по ГОСТ 25336.
Сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Бюретки для титрования, исполнения 1 и 3, 2-го класса точности с ценой деления 0,1 см по ГОСТ 29251.
Воронки стеклянные для фильтрования по ГОСТ 25336.
Часы сигнальные или песочные на 3 мин.
Фильтры бумажные.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч. или ч.д.а.
Гидроокись натрия по ГОСТ 4328.
Калий-натрий виннокислый по ГОСТ 5845, х.ч.
Гипосульфит натрия, раствор массовой концентрации 0,1 моль/дм.
Натрий уксуснокислый по ГОСТ 2080.
Натрий углекислый по ГОСТ 83.
Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, раствор массовой концентрации 1 моль/дм.
Калий двухромовокислый по ГОСТ 4220, раствор массовой концентрации 0,1 моль/дм.
Калий йодистый по ГОСТ 4232, раствор с массовой долей 30%.
Медь сернокислая по ГОСТ 4165.
Препарат ферментный глюкоамилазы очищенный по ТУ 64-13-18.
Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.
Вода дистиллированная по ГОСТ
6709.
2.2. Подготовка к испытанию
2.2.1. Подготовка пробы
Среднюю пробу испытуемого продукта измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Частицы, оставшиеся на сите в количестве до 1%, удаляют.
2.2.2. Приготовление раствора сернокислой меди (раствор Фелинга 1)
Навеску сернокислой меди массой 40 г переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем дистиллированной водой до метки.
2.2.3. Приготовление щелочного раствора виннокислого калия-натрия (раствор Фелинга 2)
200 г виннокислого калия-натрия и 150 г гидроокиси натрия растворяют примерно в 400 см дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см. После охлаждения раствора объем его доводят дистиллированной водой до 1000 см.
2.2.4. Приготовление раствора крахмала с массовой долей 1%
Навеску растворимого крахмала массой 1 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, добавляют 25 см дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Затем в колбу добавляют еще 25 см дистиллированной воды, помещают колбу в кипящую водяную баню и, непрерывно перемешивая, выдерживают до полного растворения крахмала. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры и объем доводят дистиллированной водой до метки, после чего содержимое колбы перемешивают стеклянной палочкой.
Раствор крахмала готовят в день проведения анализа.
2.2.5. Приготовление раствора гипосульфита натрия массовой концентрации 0,1 моль/дм
Для приготовления раствора гипосульфита натрия массовой концентрации 0,1 моль/дм и установления его титра 25 г соли растворяют в 1 дм дистиллированной воды, к полученному раствору прибавляют 0,1 г углекислого натрия, оставляют стоять в течение суток и устанавливают титр по 0,1 моль/дм раствора двухромовокислого калия (4,9036 г двухромового кислого калия растворяют в 1 дм воды).
Для установления титра раствора гипосульфита в колбу с притертой пробкой приливают точно 20 см 0,1 моль/дм раствора двухромовокислого калия, доливают водой до 100 см, прибавляют при помешивании 4 см концентрированной серной кислоты и 4 см раствора йодистого калия с массовой долей 30%. Колбу закрывают пробкой и оставляют в темном месте на 2-3 мин, затем титруют раствором гипосульфита натрия, все время интенсивно перемешивая жидкость, пока коричневый цвет раствора не перейдет в светло-желтый, прибавляют 1 см 1%-ного раствора крахмала и продолжают титрование до исчезновения синей окраски и перехода ее в зеленоватую.
Поправочный коэффициент () к точно 0,1 моль/дм раствора гипосульфита определяют по формуле
,
где - объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование, см.
2.2.6. Приготовление раствора серной кислоты с плотностью 1,14 г/см
В колбу вместимостью 1000 см наливают 500 см дистиллированной воды, туда же осторожно добавляют 228,9 г концентрированной серной кислоты плотностью 1,84 г/см. После охлаждения до комнатной температуры раствор доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Плотность полученного раствора должна составлять 1,14 г/см.
2.2.7. Приготовление ацетатного буфера с рН=4,7-5,0
Для приготовления ацетатного буфера берут раствор ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 1 моль/дм (60,12 г уксусной кислоты на 1 дм воды) и уксуснокислого натрия (136,09 г уксуснокислого натрия на 1 дм).
Ацетатную буферную смесь готовят смешиванием указанных растворов в соотношении от 1:1 до 1:2 соответственно значениям рН 4,7-5,0.
2.2.8. Приготовление раствора ферментного препарата глюкоамилазы
Навеску ферментного препарата очищенной глюкоамилазы массой 1 г при глюкоамилазной активности препарата (ГлА) 1000 Ед на 1 г или 0,5 г при активности препарата 2000 ГлА на 1 г помещают в стеклянный стаканчик вместимостью 25-30 см. Туда же добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно растирают стеклянной палочкой до получения однородной массы. Полученную массу количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и, при необходимости, фильтруют через стеклянную воронку с бумажным фильтром. 1 см раствора ферментного препарата имеет глюкоамилазную активность 10 Ед. При необходимости активность препарата глюкоамилазы проверяют по ГОСТ 20264.4.
Раствор ферментного препарата хранят не более суток при температуре от плюс 2 до минус 4 °С.
2.3. Проведение испытания
Навеску испытуемой пробы массой 1 г помещают в коническую колбу вместимостью 100 см. Затем приливают 25 см дистиллированной воды температурой 37 °С, 3 см ацетатного буфера и 2 см раствора ферментного препарата. Колбы выдерживают в биологическом термостате 1 ч при 37 °С, периодически, примерно через 15 мин, перемешивая их содержимое. После этого отбирают 10 см недосадочной жидкости и переносят в коническую колбу, куда предварительно наливают 10 см раствора Фелинга 1 и 10 см раствора Фелинга 2. Полученную смесь нагревают до кипения на электроплитке или газовой горелке и кипятят 3 мин, при этом выпадает осадок закиси меди красно-бурого цвета. После охлаждения до комнатной температуры в колбу с осадком вносят 20 см раствора серной кислоты, приготовленной по п.2.2.6, и 2 г йодистого калия.
Выделившийся свободный йод быстро оттитровывают раствором гипосульфита натрия, приготовленного по п.2.2.5, до кофейной окраски, после чего вносят 1 см раствора растворимого крахмала и снова титруют до молочно-белой окраски.
Параллельно опыту ставят контрольный опыт, в котором вместо недосадочной жидкости берут 10 см дистиллированной воды, остальные операции проводят в той же последовательности, что и для опытной пр
обы.
2.4. Обработка результатов
Количество глюкозы () в миллиграммах в 1 г сухого вещества анализируемой пробы вычисляют по формуле
,
где - объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование контрольной пробы, см;
- объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование опытной пробы, см;
30 - объем исходной суспензии в колбе, см;
3,3 - коэффициент пересчета 0,1 моль/дм раствора гипосульфита натрия на глюкозу, установленный экспериментальным путем;
- поправочный коэффициент к титру гипосульфита натрия;
10 - количество гидролизата, израсходованное на анализ;
- массовая доля влаги в анализируемой пробе, г.
Вычисления проводят до первого десятичного знака с последующим округлением до целого числа.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 10% от среднеарифметического результата.
3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ДЕСТРУКЦИИ КРАХМАЛА МЕТОДОМ ОЦЕНКИ
СОСТОЯНИЯ КРАХМАЛА НА ПРИБОРЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСЛА ПАДЕНИЯ
(Экспрессный метод)
Сущность метода заключается в быстрой клейстеризации водяной суспензии размолотого зерна на кипящей водяной бане и последующем определении степени разжижения амилазами крахмала, содержащегося в пробе, по числу падения, выражающемуся периодом времени с момента погружения вискозиметрической пробирки в кипящую воду, необходимым для падения мешалки вискозиметра с определенной высоты через водную суспензию, полученную из размолотого зерна и находящуюся в вискозиметрической пробирке в состоянии разжижения.
3.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Прибор для определения числа падения.
Пробирки вискозиметрические с внутренним диаметром (21,00±0,02) мм, наружным диаметром (23,80±0,3) мм.
Пробки резиновые N 22 для вискозиметрических пробирок.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с допускаемой погрешностью взвешивания ±0,01 г.
Мельница лабораторная электрическая.
Пипетки исполнения 2, 2-го класса точности вместимостью 1 и 25 см по НТД.
Цилиндр исполнения 1 вместимостью 100 см по ГОСТ 1770.
Колбы конические вместимостью 150 см по ГОСТ 25336.
Сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Плитка электрическая или горелка газовая.
Ножницы.
Палочки стеклянные длиной 13-20 см.
Бумага индикаторная лакмусовая или универсальная.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Ферментные препараты: амилосубтилин (-амилаза) по ГОСТ 23635 и глюкоамилаза очищенная по ТУ 64.13.18.
Примечание. Допускается использовать импортную аппаратуру, мерную посуду или другие средства измерений, имеющие такие же или более высокие метрологические характеристики.
3.2. Подготовка к испытанию
3.2.1. Подготовка пробы
Среднюю пробу испытуемого продукта измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Частицы, оставшиеся на сите в количестве до 1%, удаляют.
3.2.2. Приготовление раствора ферментных препаратов
Для приготовления растворов амилазы (Ас) и глюкоамилазы (ГлА) используют ферментные препараты из расчета содержания в 1 см раствора 0,8 Ед Ас и 10 Ед ГлА.
Расчет для взятия навесок ферментов проводят следующим образом.
Например, согласно качественным удостоверениям активность препарата -амилазы составляет 600 Ед Ас на 1 г препарата, а активность глюкоамилазы - 1000 Ед ГлА на 1 г препарата.
Исходя из этого для приготовления рабочего раствора ферментных препаратов 133 мг препарата -амилазы и 1 г препарата глюкоамилазы растворяют поочередно, начиная с глюкоамилазы, в 100 см дистиллированной воды при температуре 55 °С и рН 4,7-5,0 и охлаждают до комнатной температуры.
3.3. Проведение испытания
Навеску размолотого зерна помещают в вискозиметрическую пробирку прибора для определения числа падения. Массу навески устанавливают по таблице, учитывая значения влажности продукта (см. приложение).
Затем в пробирку наливают пипеткой 1 см рабочего раствора ферментных препаратов, приготовленного по п.3.2.2, и дистиллированную воду в количестве, указанном в таблице. Пробирку закрывают резиновой пробкой и энергично встряхивают не менее 20 раз до получения однородной суспензии.
В случае затруднения в получении однородной суспензии пробку вынимают и перемешивают содержимое пробирки стеклянной палочкой. Затем колесиком шток-мешалки перемещают прилипшие частицы продукта со стенок в общую массу суспензии. Все операции по подготовке суспензии проводят в течение 60-90 с.
Для определения числа падения пробирку с суспензией помещают в отверстие в крышке кипящей водяной бани прибора, закрепив ее держателем таким образом, чтобы фотоэлемент прибора находился против шток-мешалки. В то же время автоматически включается счетчик времени. Через 5 с после погружения пробирки в водяную баню автоматически начинает работать шток-мешалка, которая перемешивает суспензию в пробирке. Через 60 с шток-мешалка автоматически останавливается в верхнем положении, затем начинается ее свободное падение. После полного опускания шток-мешалки счетчик автоматически останавливается.
По счетчику определяют число падения () - время в секундах с момента погружения пробирки с суспензией в водяную баню до момента полного опускания шток-мешалки.
3.4. Обработка результатов
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.
Вычисление проводят до первого десятичного знака с последующим округлением результата до целого числа.
Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений () и между результатами, полученными в разных условиях (), в секундах, при двусторонней доверительной вероятности 0,95 не должны превышать следующих значений
;
,
где - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, с;
- среднеарифметическое значение результатов двух испытаний, выполненных в разных условиях, с.
Пример. Результаты испытания по первой навеске - 68 с, по второй - 73 с. Среднеарифметическое значение - 70,5 с. Допускаемое расхождение от этого среднего арифметического значения составляет 8,1 с.
Фактическое расхождение между результатами испытания двух навесок составляет 5 с, что не превышает допускаемого расхождения между ними.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Справочное
Табличные данные для определения массы навески и воды
в зависимости от влажности продукта
Влажность пробы, % | Масса навески, г | Общее количество воды с ферментным раствором на пробу, см |
2,0-2,3 | 6,89 | 26,8 |
2,4-2,6 | 6,92 | |
2,7-2,9 | 6,94 | |
3,0-3,2 | 6,96 | |
3,3-3,5 | 6,98 | |
3,6-3,8 | 7,00 | 26,7 |
3,9-4,1 | 7,03 | |
4,2-4,4 | 7,05 | |
4,5-4,7 | 7,07 | |
4,8-5,0 | 7,09 | |
5,1-5,3 | 7,12 | 26,6 |
5,4-5,6 | 7,14 | |
5,7-5,9 | 7,16 | |
6,0-6,2 | 7,19 | |
6,3-6,5 | 7,21 | 26,5 |
6,6-6,8 | 7,24 | |
6,9-7,1 | 7,26 | |
7,2-7,4 | 7,28 | |
7,5-7,7 | 7,30 | 26,4 |
7,8-8,0 | 7,33 | |
8,1-8,3 | 7,35 | |
8,4-8,6 | 7,37 | |
8,7-8,9 | 7,40 | 26,3 |
9,0-9,2 | 7,42 | |
9,3-9,5 | 7,45 | |
9,6-9,8 | 7,47 | |
9,9-10,1 | 7,50 | 26,2 |
10,2-10,4 | 7,52 | |
10,5-10,7 | 7,55 | |
10,8-11,0 | 7,57 | |
11,1-11,3 | 7,60 | 26,1 |
11,4-11,6 | 7,62 | |
11,7-11,9 | 7,65 | |
12,0-12,2 | 7,68 | |
12,3-12,5 | 7,70 | 26,0 |
12,6-12,8 | 7,73 | |
12,9-13,1 | 7,76 | |
13,2-13,4 | 7,78 | |
13,5-13,7 | 7,81 | |
13,8-14,0 | 7,81 |
Электронный текст документа
и сверен по:
М.: ИПК Издательство стандартов, 2004