ГОСТ 32428-2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЕТОДЫИСПЫТАНИЙ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Определение хронической токсичности для рыб: 14-дневный тест
Testing of chemicals of environmental hazard. Fish prolonged toxicity test: 14-day study
МКС 71.040.50
Дата введения 2014-08-01
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 61-П от 5 ноября 2013 г. N 61-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Азербайджан | AZ | Азстандарт |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
Украина | UA | Минэкономразвития Украины |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 798-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32428-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту OECD, Test No. 204* ("Рыба, хроническая токсичность: 14-дневное исследование" ("Fish, Prolonged Toxicity Test: 14-Day Study", IDT)
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - .
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2019 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает методы измерения смертельных и других наблюдаемых эффектов воздействия вредных факторов на рыб, подвергнутых воздействию тестового вещества.
2 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями:
2.1 полустатический тест (Semi-static test): Тест, где тестовое вещество периодически обновляется (например, каждые 24 ч).
2.2 динамический тест (Flow-through test): Тест, при проведении которого в испытательных аквариумах вода непрерывно обновляется, тестовое вещество переносится водой.
2.3 пороговый уровень смертельного эффекта (Threshold level of lethal effect): Самая низкая концентрация тестового вещества в тестовом растворе, в котором наблюдается смертельный эффект.
2.4 пороговый уровень наблюдаемых эффектов (Threshold level of observed effects): Наименьшая концентрация тестового вещества, вызывающая иной эффект, кроме смертельного, у значительного количества подопытных животных.
2.5 NOEC (неэффективная наблюдаемая концентрация) (no observed effect concentration): Самая высокая известная концентрация при проведении испытания, которая не имеет никакого статистически значимого смертельного или другого эффекта.
3 Основные положения
3.1 Вещество-эталон
Для данного испытания не рекомендуются вещества-эталоны. Однако, если такое вещество-эталон использовалось, то должны быть приведены результаты.
3.2 Принципы и методы
Через равные промежутки времени в течение теста, который составляет по крайней мере 14 дней, определяют пороговые значения смертельного и других эффектов, а также NOEC. В случае необходимости период поведения испытания должен быть увеличен на 7-14 дней.
3.3 Условия достоверности теста
3.3.1 Смертность животных в конце теста не должна превышать 10%.
3.3.2 Концентрация растворенного кислорода в течение теста должна составлять, по крайней мере, 60% от концентрации насыщения.
3.3.3 В полустатических тестах можно использовать аэрирование, если оно не приводит к значительной потере тестируемого вещества.
3.3.4 Необходимо подтвердить, что концентрация тестируемого вещества поддерживается на постоянном уровне (она должна составлять 80% от номинальной концентрации) до завершения периода проведения испытания. Результаты должны быть основаны на средних концентрациях, если отклонение от номинальной концентрации больше 20%.
4 Подготовка к испытанию
4.1 Оборудование
Используется следующее лабораторное оборудование:
- оборудование для определения температуры, рН, концентрации кислорода и жесткости воды;
- соответствующий прибор для регулирования температуры;
- тестовые емкости (аквариумы), изготовленные из химически инертного материала, и удовлетворяющие требованиям теста.
4.2 Растворы тестируемого вещества
4.2.1 Основные растворы соответствующих концентраций готовятся путем растворения требуемого количества тестируемого вещества в необходимом объеме разбавляющей воды. Для плохо растворимых веществ могут быть применены механические дисперсии или в случае необходимости дисперсии с помощью вспомогательных веществ, таких, как солюбилизаторы, имеющие низкую токсичность для рыб.
4.2.2 Концентрация органических растворителей, эмульгаторов или диспергаторов не должна превышать 100 мг/л в основном растворе.
4.2.3 Испытуемые растворы реактива выбранных концентраций подготовлены путем разбавления основного раствора.
4.2.4 Тест должен быть выполнен без регуляции рН. Если есть доказательства значимых изменений рН воды в тестовой емкости после внесения тестируемого вещества, то следует повторить тест, используя регуляторы рН основного раствора перед его внесением. Регуляция рН выполняется таким образом, чтобы степень концентрации основного раствора не изменялась в значительной степени, и исключалась химическая реакция или физическое осаждение тестируемого вещества. Для регулирования рН предпочтительно использовать или 
.
4.3 Подопытные животные
4.3.1 Выбор видов рыб
Необходимо использовать один или несколько видов рыб на усмотрение лаборатории, в которой проводится испытание. Однако лучше использовать виды, рекомендованные для определения острой токсичности для рыб [1]. Используемые виды рыб должны быть отобраны на основе таких важных практических критериев, как, например, их доступность в течение года, неприхотливость в содержании, удобство проведения испытания и всех относящихся к тесту экономических, биологических или экологических факторов. Особи рыб должны быть здоровы и без патологий.
Рыбы, упомянутые в [1], исключительно просты в разведении и широко распространены в течение года. Они могут быть выведены и выращены в рыбоводческих хозяйствах или в лаборатории, при условиях, исключающих распространение заболеваний, в том числе паразитарных, и иметь известное происхождение. Эти рыбы доступны повсеместно.
Если при испытании используются другие виды рыб, то метод должен быть адаптирован к соответствующим условиям испытания.
4.3.2 Содержание рыб
Таблица 1 - Параметры содержания рыб
Акклиматизация: | Минимум 12-15 дней. Все рыбы должны быть экспонированы по крайней мере 7 дней перед тестом в той же самой воде, которая будет использована в эксперименте. Следует избегать любых действий, способных вызывать изменение поведения рыб |
Вода: | Любая питьевая вода (дехлорированная в случае необходимости), природная вода хорошего качества, искусственно приготовленная вода [1]. Предпочтительна вода с общей жесткостью 50-250 мг |
Свет: | Фотопериод составляет 12-16 ч ежедневно |
Температура: | Соответственно виду [1] |
Кислород | По крайней мере 80% от насыщающей концентрации |
Профилактическая чистка | Следует избегать профилактических чисток, если это невозможно, указать в результатах теста |
Кормление: | 1 раз в день |
Смертность: | После периода адаптации в 48 ч, смертность регистрируют по следующим критериям: |
на литр и рН 6,0-8,5. Реактивы, используемые для приготовления разбавляющей воды, должны иметь аналитическую чистоту и растворяться в деионизированной или дистиллированной воде с удельной электропроводностью, равной или меньшей 10 Scm
5 Проведение испытания
5.1 Если в подготовке основного раствора тестового вещества используется растворитель, то необходимо проводить наблюдение над дополнительной группой контроля, подвергаемой действию самой высокой концентрации растворителя, используемой при испытании.
5.2 В динамическом тесте концентрация вещества в тестируемом растворе может быть определена в начале теста, в полустатическом тесте - в начале, сразу перед первым обновлением тестируемого раствора и в конце эксперимента. Кроме аналитических исследований могут быть использованы и другие методы, позволяющие продемонстрировать, что были выдержаны соответствующие концентрации тестируемого вещества.
5.3 Условия экспонирования
Таблица 2 - Условия проведения испытания
Продолжительность: | Обычно 14 дней, но может быть увеличена на одну или две недели |
Аквариумы: | Могут быть использованы любые подходящие емкости |
Загрузка: | Максимальная загрузка для полустатического теста рекомендуется 1,0 г рыбы на 1 л; более плотная загрузка возможна в динамическом тесте |
Количество рыб | По крайней мере 10 для каждой концентрации и контроля |
Тестовые концентрации | Выбранные тестовые концентрации позволяют определить как пороговые концентрации, так и другие наблюдаемые эффекты NOEC. Нет необходимости проводить испытание на концентрации вещества более 100 мг/л, если не было получено пороговое значение при этой концентрации |
Вода: | Любая питьевая вода (дехлорированная в случае необходимости), природная вода хорошего качества, искусственно приготовленная вода [1]. Предпочтительна вода с общей жесткостью 50-250 мг |
Освещение | Фотопериод составляет 12-16 ч ежедневно |
Температура: | Соответствующая виду (см. табл.1 [1]) и постоянная в пределах ±2 °С |
Концентрация кислорода | Не меньше 60% от максимальной насыщающей концентрации в течение теста |
Кормление: | Несколько раз в день (количество подаваемого корма не должно превышать общее количество, которое рыбы могут съесть немедленно) или ежедневно (количество корма остается постоянным, например 2% от сухого веса, связанного с начальным весом рыбы) |
Чистка: | В динамическом тесте аквариумы должны чиститься по мере необходимости, по крайней мере, 2 раза в неделю, в полустатическом - тестовая емкость (аквариум) заменяется на чистый каждый раз после замены воды |
на литр и рН 6,0-8,5. Реактивы, используемые для приготовления разбавляющей воды, должны иметь аналитическую чистоту и растворяться в деионизированной или дистиллированной воде с удельной электропроводностью, равной или меньшей 10 Scm5.4 Наблюдения
5.4.1 Наблюдаемые эффекты определены следующим образом.
Летальные эффекты: рыбы признаются мертвыми при отсутствии дыхательных движений и других реакций на небольшие механические раздражения.
Другие эффекты, кроме летальных, включают эффекты, наблюдаемые в размере и поведении рыб, которые явно отличаются от контрольных, например различные изменения в поведении, реакции на внешние раздражители, изменения внешнего вида рыбы, сокращение или прекращение питания, изменения в длине или весе тела рыбы.
5.4.2 Рыб осматривают, по крайней мере, один раз в день для констатации смерти. Мертвых рыб удаляют.
5.4.3 Необходимо ежедневно документировать все наблюдаемые эффекты, но как минимум, три наблюдения в неделю должны быть проведены.
5.4.4 Измерения рН, растворенного кислорода и температуры должны выполняться не реже двух раз в неделю.
5.4.5 До начала эксперимента вся популяция рыб должна быть взвешена и измерена. По завершении теста все оставшиеся в живых рыбы должны быть взвешены и измерены. Особи рыб не должны взвешиваться или измеряться во время теста, поскольку это может привести к повреждению и (или) смерти.
6 Результаты и отчет
6.1 Интерпретация результатов
Если стабильность или гомогенность тестируемых растворов не может быть соблюдена, то интерпретацию результатов необходимо проводить с осторожностью. Следует отметить, что результаты не являются воспроизводимыми.
6.2 Отчет о проведении теста
Отчет о проведении теста должен содержать следующую информацию:
- о тестируемом веществе: данные химической идентификации вещества;
- о подопытных организмах: научное название, размер, поставщик, любая предварительная обработка и т.д.
Условия проведения испытания:
- использованная испытательная процедура (полустатический, или динамический тест, аэрирование, плотность посадки рыбы, и т.д.);
- качественные характеристики воды (подготовка, включая дехлорирование, концентрация растворенного кислорода, рН, жесткость, температура, любая другая имеющаяся информация);
- концентрация растворенного кислорода, рН, температура и общая жесткость тестового раствора в каждый из рекомендуемых периодов наблюдения;
- методы подготовки маточного и тестовых растворов реактива, используемые концентрации;
- информация о способах поддержания концентрации тестового вещества в растворе;
- количество рыб в каждой тестовой концентрации.
Результаты:
- наблюдаемые эффекты для каждой тестовой концентрации в течение всего периода испытания, оформленные в таблицы;
- концентрации, вызвавшие смертельные или другие воздействия, могут быть представлены графически с указанием времени;
- пороговый уровень летального эффекта;
- пороговый уровень наблюдаемых эффектов;
- NOEC;
- совокупная смертность при каждой концентрации на каждый момент наблюдения, если возможно;
- смертность в контрольной группе;
- наблюдения за поведением рыб;
- инциденты в ходе испытания, которые, возможно, повлияли на его результаты;
- любые отклонения от стандарта.
Библиография
[1] | OECD Test No. 203: Fish, Acute Toxicity Test, 1992. |
[2] | OECD Test No. 204: Fish, Prolonged Toxicity Test: 14-Day Study, 1984. |
[3] | D.M.M. Adema, in Degradability, Ecotoxicity and Bioaccumulation, Chapter 5, Government Publishing Office, The Hague (1980). |
[4] | R.Bathe, Arch. Toxicol. Suppl. 2, 417-423 p. (1979) |
УДК 658.382.3:006.354 | МКС 71.040.50 |
Ключевые слова: химическая продукция, водная среда, метод испытаний, определение хронической токсичности | |
Электронный текст документа
и сверен по:
, 2019