ГОСТ Р 54068-2010
Группа Н09
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Консервы фруктовые
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ ЭРИТРОЗИНА И ФЛОКСИНА В
Canned fruits. Method for determination of synthetic colours Erythrosine and Phloxine В presence
ОКС 67.080.10
ОКСТУ 9109
Дата введения 2012-01-01
Предисловие
Цели и принципы стандартизации Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевых ароматизаторов, кислот и красителей Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПАКК Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 154 "Пищевые добавки и ароматизаторы"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 704-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на фруктовые консервы: плодово-ягодные консервированные компоты (далее компоты) и устанавливает хроматографический метод определения наличия и идентификации синтетических красителей эритрозина и флоксина В (далее по тексту - красители).
По данному методу предел обнаружения красителей составляет не менее 0,0012%.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 7886-1-2009 Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования
ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия
ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 8756.0-70 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию
ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия
ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Метод анализа
3.1 Сущность метода
Метод анализа основан на водно-спиртовой экстракции красителей из измельченной твердой части анализируемых компотов и сорбции из экстракта и жидкой части компотов твердыми сорбентами, десорбции аммиаком и отделением последнего выпариванием с последующей идентификацией красителей хроматографированием в тонком слое сорбента (ТСХ).
Идентификацию красителей проводят методом сравнения значений (отношение расстояния от центра пятна обнаруженного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) каждого обнаруженного синтетического красителя со значениями (отношение расстояния от центра пятна стандартного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) контрольных образцов красителей (КО).
В качестве КО используют водно-спиртовые растворы синтетических стандартных красителей эритрозина и флоксина В.
3.2 Условия проведения анализа
При подготовке и проведении анализа должны быть соблюдены следующие условия:
температура окружающего воздуха | (22±3) °С; |
относительная влажность воздуха | (65±25)%; |
напряжение в электросети | (220±22) В; |
частота тока в электросети | (50±1) Гц. |
Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией.
Все операции с реактивами проводят в вытяжном шкафу.
3.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
3.3.1 Весы лабораторные с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,1 мг и ±100 мг.
3.3.2 Воронка лабораторная типа В-36-80 ХС по ГОСТ 25336.
3.3.3 Пластина для тонкослойной хроматографии с силикагелем на полимерной подложке размером сторон 10х10 см.
3.3.4 Камера хроматографическая размером сторон 12х12x5 см.
3.3.5 Патрон для твердофазной экстракции с сорбентом оксида алюминия.
3.3.6 Алюминия оксид активированный кислый рН=4,5±0,5, зернением от 0,05 до 0,15 мм, удельной поверхностью 155 м/г для колоночной хроматографии.
3.3.7 Шприц медицинский инъекционный вместимостью от 10 до 20 см по ГОСТ Р ИСО 7886-1.
3.3.8 Микрошприц типа МШ-1 или Газохром-101 вместимостью 1,0 мм (1 мкл) с ценой деления не более 0,02 мм (0,02 мкл).
3.3.9 Пипетки с одной меткой вместимостью 5 см 1-го класса точности по ГОСТ 29169.
3.3.10 Пипетки градуированные вместимостью 1, 5, 10 см 1-го класса точности по ГОСТ 29227.
3.3.11 Стаканы термостойкие вместимостью 50, 200 см по ГОСТ 25336.
3.3.12 Колбы мерные с пришлифованной пробкой вместимостью 25, 50, 100, 250 см 1-го класса точности по ГОСТ 1770.
3.3.13 Пробки стеклянные с конусом 29/32 по ГОСТ 1770.
3.3.14 Чашка выпарная круглодонная вместимостью 100 см по ГОСТ 25336.
3.3.15 Палочка стеклянная с оплавленным концом.
3.3.16 Термостат или баня водяная.
3.3.17 Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.
3.3.18 Линейка металлическая по ГОСТ 427.
3.3.19 Пинцет медицинский по ГОСТ 21241.
3.3.20 Красители синтетические стандартные эритрозин и флоксин В массовой долей красящих веществ не менее 85% по 3.4.4.1.
3.3.21 Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч., ледяная, раствор массовой концентрации 10 г/дм готовят по ГОСТ 4517.
3.3.22 Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.
3.3.23 Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч.д.а., раствор массовой концентрации 250 г/дм.
3.3.24 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.3.25 Ацетон по ГОСТ 2603, ч.д.а.
3.3.26 Метилэтилкетон (2-бутанон) для хроматографии.
3.3.27 Мешалка магнитная с максимальной скоростью вращения магнитного ротора 1400 об/мин.
3.3.28 Фильтры бумажные обеззоленные "Красная лента".
3.3.29 Цилиндр мерный вместимостью 100 см, с ценой наименьшего деления 1 см, 1-го класса точности по ГОСТ 1770.
3.3.30 рН-метр со стеклянным электродом диапазоном измерения от 1 до 14 ед. рН и пределами допускаемой абсолютной погрешности измерений ±0,05 ед. рН.
3.3.31 Фильтры стеклянные по ГОСТ 25336.
Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.
3.4 Подготовка к анализу
3.4.1 Приготовление элюента
В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 50 см вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 6 см ацетона, 14 см метилэтилкетона, 0,1 см водного аммиака и 6 см дистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.
Элюент готовят за 1 ч до начала анализа. Не допускается повторное использование элюента.
3.4.2 Приготовление экстрагента
В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 см вносят пипеткой 0,1 см водного аммиака и отмеряют цилиндром 50 см этилового спирта и 50 см дистиллированной воды. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.
Раствор готовят непосредственно перед анализом.
3.4.3 Приготовление водно-спиртового раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см отмеряют цилиндром 50 см этилового спирта и 50 см дистиллированной воды. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.
Раствор готовят непосредственно перед анализом.
3.4.4 Приготовление растворов КО
3.4.4.1 В необходимое число стаканов вместимостью 50 см каждый взвешивают по 0,05 г красителей по 3.3.20 на лабораторных весах (с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,1 мг), характеристики которых приведены в таблице 1.
Таблица 1 - Стандартные красители и их характеристика
Наименование красителя | Номер красителя* | Номер пищевой добавки** | Значения *** |
Эритрозин | 45430 | Е127 | 0,83; |
Флоксин В | 45410 | - | 0,77; |
* Номер красителя - в соответствии с международной классификацией красителей. ** Номер красителя - в соответствии с Европейской кодификацией пищевых добавок. *** Значения получены при условиях проведения анализа стандартных синтетических красителей по 3.2 с использованием средств измерений, вспомогательного оборудования, реактивов и материалов, указанных в 3.3. | |||
3.4.4.2 В каждый стакан с 0,05 г стандартного красителя, подготовленного по 3.4.4.1, прибавляют 5 см раствора, полученного по 3.4.3, и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 70 °С. Затем раствор охлаждают до 20 °С и переносят в мерную колбу вместимостью 25 см, доводят объем до метки раствором, полученным по 3.4.3, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.
Раствор КО хранят в склянках из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре - не более 6 мес.
3.4.5 Отбор проб
Отбор проб - по ГОСТ 8756.0.
3.4.6 Подготовка проб
Подготовку проб проводят по ГОСТ 26671, при этом жидкую и измельченную твердую части не объединяют и анализируют отдельно.
3.4.7 Извлечение красителей из анализируемых проб компотов методом твердофазной экстракции
3.4.7.1 Приготовление экстракта твердой части анализируемой пробы компотов
В стакане вместимостью 50 см взвешивают на лабораторных весах по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±100 мг не менее 5 г измельченной твердой части пробы компота, полученной по 3.4.6. Затем в стакан прибавляют экстрагент, приготовленный по 3.4.2 из расчета не менее 8 см на 1 г измельченной твердой части пробы. Содержимое стакана перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.
Полученную суспензию фильтруют через стеклянный или бумажный фильтр, твердую часть промывают экстрагентом по 3.4.2 из расчета не менее 10 см на 1 г измельченной твердой части компота.
3.4.7.2 Подготовка патрона для твердофазной экстракции красителей
Медицинским шприцем набирают от 10 до 20 см раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции, заполненным оксидом алюминия. Патрон промывают раствором ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. Объем пропускаемого через патрон раствора ледяной уксусной кислоты должен быть не менее 25 см. Затем патрон отсоединяют от шприца.
3.4.7.3 Сорбция красителей из экстракта
Измеряют при 20 °С на рН-метре со стеклянным электродом значение рН экстракта, полученного по 3.4.7.1. В случае отклонения измеренного значения от заданного интервала (рН от 2,5 до 3,5 ед. рН) корректируют рН экстракта добавлением ледяной уксусной кислоты.
Медицинским шприцем набирают по 20 см экстракта и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.7.2. Пропускают анализируемый экстракт через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. По достижении нижней границей окрашенного слоя сорбента основания патрона, шприц отсоединяют от первого патрона, подсоединяют ко второму патрону и пропускают анализируемый экстракт через второй патрон. Объем пропускаемого через патрон экстракта должен быть не менее 40 см. При необходимости используют от 1 до 3 патронов, подготовленных по 3.4.7.2. После этого промывают каждый патрон с сорбированным красителем 25 см раствора ледяной уксусной кислоты по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту.
3.4.7.4 Десорбция красителей из патронов водным аммиаком
Медицинским шприцем набирают 10 см водного аммиака и соединяют шприц с патроном, содержащим краситель, сорбированный из экстракта по 3.4.7.3. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. При необходимости промывание патрона водным аммиаком повторяют до полного обесцвечивания сорбента (оксида алюминия) в патроне. Элюат (раствор водного аммиака с красителем, извлеченным из патрона) собирают в выпарную чашку и выпаривают досуха на водяной бане с температурой от 80 °С до 90 °С. Сразу после испарения раствора аммиака чашку с сухим остатком (красителем) охлаждают.
Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см раствора, приготовленного по 3.4.3.
3.4.7.5 Сорбция красителей из жидкой части анализируемой пробы компота
Измеряют при 20 °С на рН-метре со стеклянным электродом значение рН жидкой части анализируемой пробы компота, полученной по 3.4.6. В случае отклонения измеренного значения от заданного интервала (рН от 2,5 до 3,5 ед. рН) доводят рН жидкой части анализируемой пробы компота добавлением ледяной уксусной кислоты.
Медицинским шприцем набирают от 5 до 10 см жидкой части анализируемой пробы компота и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.7.2. Пропускают анализируемую жидкую часть компота через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. По достижении нижней границей окрашенного слоя сорбента основания патрона, шприц отсоединяют от первого патрона, подсоединяют ко второму патрону и пропускают анализируемую жидкую часть через второй патрон. При необходимости используют от 1 до 2 патронов, подготовленных по 3.4.7.2. После этого промывают каждый патрон с сорбированным красителем 25 см раствора ледяной уксусной кислоты по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту.
3.4.7.6 Десорбция красителей из патронов водным аммиаком
Медицинским шприцем набирают 10 см водного аммиака и соединяют шприц с патроном, содержащим сорбированный из жидкой части анализируемой пробы компота краситель по 3.4.7.5. Десорбцию красителей из патронов проводят водным аммиаком - по 3.4.7.4.
Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см раствора, приготовленного по 3.4.3.
3.4.8 Подготовка хроматографической камеры
В хроматографическую камеру вносят элюент по 3.4.1 в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают и выдерживают в течение 1 ч.
3.4.9 Подготовка пластин для ТСХ анализа
На хроматографическую пластину карандашом наносят линию старта на расстоянии 1 см от края пластины и линию границы элюента на расстоянии 7 см от линии старта (параллельно рискам на обратной стороне пластины). На линию старта карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.
3.5 Обнаружение и идентификация красителей
На хроматографическую пластину шириной 10 см, подготовленную по 3.4.9, микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм растворов КО, приготовленных по 3.4.4.2, и от 0,5 до 3,0 мм анализируемых растворов красителей по 3.4.7.4 и 3.4.7.6. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 3.4.8, под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента - 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.
Линейкой измеряют расстояние от центра каждого пятна красителя и линии границы элюента до линии старта.
4 Обработка результатов
4.1 Значение стандартного синтетического красителя вычисляют по формуле
, (1)
где - расстояние до линии старта от центра пятна стандартного синтетического красителя, см;
- расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.
4.2 Значение обнаруженного красителя вычисляют по формуле
, (2)
где - расстояние до линии старта от центра пятна обнаруженного синтетического красителя, см;
- расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.
4.3 Сравнивают значения , рассчитанные по формуле 2, со значениями КО, рассчитанными по формуле 1, и при совпадении и цвета пятен обнаруженных красителей с и цветом пятен КО делают заключение о наличии или отсутствии эритрозина и флоксина В в анализируемом компоте.
Электронный текст документа
и сверен по:
, 2011