МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ. МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (МГС) INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC)
ГОСТ 34742— 2021
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ РЫБНАЯ
Метод определения полифторированных загрязнителей с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
с масс-спектрометрическим детектированием
Издание официальное
Москва Российский институт стандартизации 2021
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 июля 2021 г. No 59)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны ле МК (ИСО Э1М} 004-9? | Код страны по МК {ИСО 31 бб) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия | KG | Кыргыэстандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Узбекистан | UZ | Уэст андарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 августа 2021 г. No 828-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34742—2021 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 декабря 2021 г.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изме-нений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в зтих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»
©Оформление. ФГБУ «РСТ». 2021
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Содержание
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Сущность метода
4 Требования безопасности и условия выполнения измерений
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы
6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.2 Приготовление растворов
6.3 Приготовление градуировочных растворов
7 Отбор и подготовка проб
7.1 Отбор проб
7.2 Подготовка проб
8 Проведение измерений
8.1 Условия хроматографического разделения
8.2 Установление градуировочной характеристики
8.3 ВЭЖХ-МС/МС измерение
9 Метрологические характеристики
10 Обработка результатов измерений
11 Оформление результатов измерений
12 Контроль качества результатов измерений
ж W
ж
,«Z
ГОСТ 34742—2021
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ РЫБНАЯ
Метод определения полифторировзнных загрязнителей с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Food and fish products. Method for determination of pdyfiuorinated pollutants by high performance liquid chromatography — mass spectrometry
Дата введения — 2021—12—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевую рыбную продукцию — рыбу и продукцию из нее и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС/МС) для определения массовых долей полифторированных загрязнителей: перфторированных алкилкарбоксилатое (ПФАК) и перфторированных алкилсульфатов (ПФАС).
Диапазон измерений массовых долей ПФАК составляет: перфтордекановой, перфтордодекановой. перфторгептановой, перфтороктановой кислот — от 1.00 до 100,00 мкг/кг. лерфторгексановой, перфторнонановой. перфторлектановой, перфтортридекановой, перфторундекановой кислот — от 2,00 до 100.00 мкг/кг: перфтортетрадекановой кислоты — от 5,00 до 100.00 мкг/кг; перфторгексадекановой кислоты — от 10.00 до 100.00 мкг/кг.
Диапазон измерений массовых долей ПФАС составляет: лерфторбутансульфата. перфтордекан* сульфата, перфторгексансульфата. перфторнонансульфата, перфтороктансульфата. перфторпентан-сульфата — от 0.10 до 10,00 мкг/кг; лерфтордодекансульфата и перфторгептансульфата — от 0,50 до 10.00 мкг/кг.
2 Нормативные ссылки
8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей эоны
ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезоласность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.2.085 Арматура трубопроводная. Клапаны предохранительные. Выбор и расчет пропускной способности
ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 1770 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 7638—85 Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа
Издание официальное
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 31339 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 34037 Упаковка стеклянная для химических реактивов и особо чистых химических веществ. Общие технические условия
ГОСТ ИСО 572516—20031 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов из1 мерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ ISO 7886-1 Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования
ГОСТ ISO/IEC 17025 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
При мечение — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов в сети Интернет на официальном сайте Межгосударственного совета по стандартизации. метрологии и сертификации (www.easc.by). или в указателях национальных стандартов, издаваемых в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайгах соответствующих органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение. на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Сущность метода
Метод основан на извлечении полифторированных загрязнителей из анализируемой пробы органическим растворителем с последующей очисткой методом твердофазной экстракции, концентрировании и количественном определении их методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.
4 Требования безопасности и условия выполнения измерений
4.1 При работе с химическими реактивами необходимо соблюдать общие требования безопасности обращения с вредными веществами, установленные ГОСТ 12.1.007. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.
4.2 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021.
4.3 Приготовление градуировочных растворов и их изотопно-меченых аналогов проводят в вытяжном шкафу.
4.4 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019, правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением. — по ГОСТ 12.2.085 и инструкции по эксплуатации приборое.
4.5 К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих высшее специальное образование. прошедших соответствующий инструктаж, владеющих техникой хромато-масс-спектрометрии и изучивших инструкции по эксплуатации применяемого оборудования.
4.6 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- температура окружающего воздуха...................................от 20 "С до 30 1С;
• относительная влажность воздуха....................................от 35 % до 85 %.
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы
5.1 Для определения содержания перфторированных алкилкарбоксилатов и перфторированных алкилсульфатов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, матери-алы и посуду:
- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ O1ML R 7621 с пределами допускаемой погрешности не более ±0.03 г;
* весы специального класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±0.3 мг;
- хроматограф жидкостный для проведения ВЭЖХ, включающий следующие элементы:
* колонку хроматографическую, заполненную обращенно-фазовым сорбентом с размером частиц не более 1.7 мкм, длиной 50 мм и внутренним диаметром 2.1 мм:
• детектор масс-слекторометрический с источником ионизации типа электроспрей, диапазоном измерений значений от 50 до 1000 атомных единиц массы (а. е. м.) в режиме получения ионов фрагментов.
- бинарный насос высокого давления со смесителем:
- термостат хроматографической колонки, обеспечивающий температуру нагрева до (45 ± 1) ’С;
- компьютерсустаноаленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений:
- картриджи для твердофазной экстракции2 вместимостью не менее 3 см3, заполненные 60 мг обращенно-фазовым сорбентом со слабыми анионообменными свойствами и диаметром частиц сорбента от 25 до 35 мкм;
* баню ультразвуковую с частотой ультразвука не менее 30 кГц;
- шейкер вортексного типа со вставкой для одной пробирки с диапазоном скоростей от 150 до 2500 об/мин;
* шейкер вортексного типа для нескольких пробирок с диапазоном скоростей от 150 до 2000 об/мин;
- генератор азота с объемной долей азота не менее 90 % и производительностью 200 дм3/мин;
- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;
- камеру лабораторную морозильную с рабочим диапазоном температур от минус 15 °C до минус 25 вС:
* систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм см;
* систему упаривания растворителей, обеспечивающую поддержание температуры не ниже 50 "С;
- устройство вакуумное для твердофазной экстракции;
- холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 2 2С до 8 'С;
- центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 4750 об/мин и диапазоном температур от 4 ’С до 25 °C с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см3;
«пробы, не содержащие перфторированные алкилкарбоксилаты и перфторированные алкилсульфаты. подготовленные и проанализированные в соответствии с требованиями разделов 7 и 8. в зависимости от типа исследуемой матрицы («чистые» пробы);
* фильтры-насадки одноразовые с диаметром 13 мм. диаметром лор 0.2 мкм;
- пробирки для автоматического устройства ввода проб, вместимостью 2 см3, с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками;
* колбы мерные 2-10 (50,100.1000)-2 по ГОСТ 1770;
- колбы П-1 -100-19/26 ТС по ГОСТ 25336;
- дозаторы одноканальные переменной вместимости 2,5—10.20—100.20—100,200—1000.500— 5000 мм3 с допустимой относительной погрешностью дозирования не более ±1 %;
- пробирки полипропиленовые вместимостью 15.50 см3 с завинчивающимися крышками;
«стекловату для химического анализа;
- шприцы одноразовые, вместимостью 2 см3 по ГОСТ ISO 7886-1;
- цилиндры 1-25 (50,1000}-1 по ГОСТ 1770;
- бутыль стеклянную БТ-ГВ-1000 по ГОСТ 34037.
5.2 При определении содержания перфторированных алкилкарбоксилатов и перфторированных алкилсульфатов применяют следующие реактивы.
* алюминия оксид нейтральный с массовой долей основного вещества не менее 90 %;
- аммония ацетат с массовой долей основного вещества не менее 99 %;
- аммония гидроксид с массовой долей основного вещества не менее 25 %;
* ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99.9 %;
- воду деионизированную высокой чистоты с удельным сопротивлением 18,2 МОм ■ см при температуре 25 вС;
- кислоту муравьиную с массовой долей основного вещества не менее 99.0 %;
- метанол для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %.
5.3 При определении остаточного содержания перфторированных алкилкарбоксилатов и перфторированных алкилсульфатов в качестве образцов сравнения применяют нижеприведенные стандарты.
5.3.1 Для приготовления рабочих стандартных растворов с массовой концентрацией основного вещества не менее 50.0 мкг/см3:
- перфторбутансульфат, Cas3 № 45187-15-3;
* лерфтордодекансульфат. Cas № 79780-39-5:
* перфтордвкансульфат. Cas No 2806-15-7;
- перфторгептансульфат. Cas No 375-92-8;
* лерфторгексансульфат. Cas No 82382-12-5;
- перфторнонансульфат. Cas No 98789-57-2;
- перфтороктансульфат, Cas No 4021-47-0;
- перфторпентансульфат. Cas No 2706-91-4;
- лерфтордекановая кислота. Cas No 335-76-2;
- перфтордодекановая кислота. Cas No 307-55-1:
* перфторгептановая кислота. Cas No 375-85-9;
* перфторгексановая кислота. Cas No 307-24-4;
- перфторгексадекановая кислота. Cas No 67905-19-5;
* перфторнонановая кислота. Cas No 375-95-1;
* перфтороктановая кислота. Cas No 335-67-1;
* перфторпентановая кислота. Cas No 2706-90-3:
- перфтортетрадекановая кислота. Cas No 376-06-7;
* перфтортридекановая кислота. Cas No 72629-94-8;
- перфторундекановая кислота. Cas No 2058-94-8.
5.3.2 Для приготовления рабочих стандартных изотолно-меченных растворов с массовой долей основного вещества не менее 50.0 мкг/смэ:
- МЗ-лерфторгексансульфат;
- М8-перфтороктансульфат;
* М5-лерфторлентановая кислота;
- М5-лерфторгексановая кислота;
- М4-перфторгептановая кислота;
- М-перфтороктановая кислота;
- М-перфторнонановая кислота;
- Мб-перфтордеканоеая кислота;
- М7-перфторундекановая кислота;
- М-лерфтордодекановая кислота.
5.4 Допускается применение других средств измерений, не уступающих вышеуказанным по метрологическим характеристикам, обеспечивающим необходимую точность измерения, вспомогательного оборудования — техническим характеристикам, а также материалов, посуды и реактивов, по качеству не ниже вышеуказанных.
6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.1.1 Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.
6.1.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой: однократно смесью спирт этиловый/деионизированная вода в объемном соотношении 1:1. после чего дважды — деионизированной водой.
6.1.3 Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, при температуре от 100 *С до 110 ’С.
6.1.4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.
6.2 Приготовление растворов
6.2.1 Приготовление смеси метанол-ацетонитрил-гидрооксид аммония в объемном соотношении (49,5:49,5:1,0)
8 плоскодонную колбу со шлифтом вместимостью 100 см3 вносят 49.5 см3 метанола. 49.5 см3 ацетонитрила и 1.0 см3 гидрооксида аммония и перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более одной недели.
6.2.2 Приготовление смеси метанол-ацетонитрил«деионизированная вода в объемном соотношении (25:25:50)
8 плоскодонную колбу со шлифтом вместимостью 100 см3 вносят 25 см3 метанола. 25 см3 ацетонитрила и 50 см3 деионизованной воды и перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 7 сут.
6.2.3 Приготовление 5 %-ного раствора муравьиной кислоты
В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 2,5 см3 муравьиной кислоты, затем доводят объем раствора деионизированной водой при температуре (20 ± 5) *С до 50 см3 по метке на колбе и перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 7 сут.
6.2.4 Приготовление смеси метанол-гидрооксид аммония в объемном соотношении (99:1)
В плоскодонную колбу со шлифтом вместимостью 100 см3 вносят 99 см3 метанола. 1 см3 гидрооксида аммония и перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 7 сут.
6.2.5 Приготовление смеси метанол-ацетонитрил в объемном соотношении (1:1)
8 мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 500 см3 метанола, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.
6.2.6 Приготовление подвижных фаз А и Б
6.2.6.1 Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 0,77 г ацетата аммония, приливают 300—600 см3 деионизированной воды, перемешивают, затем доводят объем раствора при температуре (20 ± 5) *С деионизованной водой до метки на колбе, перемешивают и переливают в бутыль для хроматографирования.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 2 мес.
6.2.6.2 Для приготовления подвижной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 0,77 г ацетата аммония, приливают 300—600 см3 раствора, приготовленного по 6.2.5. перемешивают, затем доводят объем раствора при температуре (20 ± 5) °C до метки на колбе, перемешивают и переливают в бутыль для хроматографирования.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.
6.3 Приготовление градуировочных растворов
6.3.1 Приготовление рабочего стандартного раствора С1 с массовыми концентрациями ПФАК 1000 нг/см3 и ЛФАС 100 нг/см3
8 мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят по 0.2 см3 стандартов индивидуальных ПФАК с массовой концентрацией 50 нг/см3 и по 0.02 см3 перфторированных ПФАС с массовой концентрацией 50 нг/см3, доводят объем раствора до метки ацетонитрилом и перемешивают.
Срок хранения раствора в полипропиленовой пробирке с завинчивающейся крышкой при темпе* ратуре от 0 аС до 5 аС — не более одного года.
6.3.2 Приготовление рабочего стандартного раствора С2 с массовыми концентрациями ПФАК 100 нг/см3 и ПФАС 10 нг/см3
В мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см3 рабочего стандартного раствора Сг доводят объем раствора до метки ацетонитрилом, перемешивают.
Срок хранения раствора в полипропиленовой пробирке с завинчивающейся крышкой при темпе* ратуре от 0 аС до 5 аС — не более одного года.
6.3.3 Приготовление рабочего стандартного раствора Dt изотопно-меченных ПФАК с мае* совыми концентрациями 1000 нг/см3 и изотопно-меченных ПФАС 100 нг/см3
В мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят по 0.2 см3 стандартов индивидуальных изотопно-меченных ПФАК с массовой концентрацией 50 нг/см3 и по 0.02 см3 изотопно-меченных ПФАС с массовой концентрацией 50 нг/см3. доводят объем раствора до метки ацетонитрилом, перемешивают.
Срок хранения раствора в полипропиленовой пробирке с завинчивающейся крышкой при температуре от О °C до 5 аС — не более одного года.
6.3.4 Приготовление градуировочных растворов б,—Gr
Для построения градуировочной кривой готовят серию градуировочных растворов G,—G7 из «чистых» проб (подготовленных и проанализированных ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8. не содержащих определяемых компонентов) массой (0.5 ± 0.03) г каждый, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см3. в которые вносят рабочие растворы определяемых аналитовС, (см. 6.3.1), С2 (см. 6.3.2) и раствор их изотопно-меченных аналогов О, (см. 6.3.3) в соответствии с таблицей 1. Содержимое пробирок аккуратно перемешивают с помощью шейкера вортексного типа, оставляют для уравновешивания на 15 мин и затем проводят через все стадии пробоподготовки согласно 7.2.1.7.2.2.
Серию градуировочных растворов анализируют согласно разделам 7 и 8.
Таблица 1 — Приготовление градуировочных растворов G,—Gj
Наименование и массовая концентрация градуировочного раствора | Вносимый объем рабочего раствора, см3 | ||
Ст | С2 | Ci | |
G, (ПФАК 100.00 мкг/кг. ПФАС 10.00 мкг/кг) | 0.0500 | — | 0.0250 |
(ПФАК 50.00 мкг/кг. ПФАС 5,00 мкг/кг) | 0.0250 | — | 0.0250 |
G3 (ПФАК 25.00 кжг/кг. ПФАС 2.50 мкг/кг) | 0.0125 | — | 0.0250 |
G4 (ПФАК 10.00 мкг/кг. ПФАС 1.00 мкг/кг) | — | 0.0500 | 0.0250 |
Gs (ПФАК 5.00 мкг/кг. ПФАС 0.5 мкг/кг) | — | 0.0250 | 0.0250 |
G6 {ПФАК 2.00 мкг/кг. ПФАС 0.20 мкг/кг) | — | 0.0100 | 0.0250 |
G? (ПФАК 1.00 мкг/кг. ПФАС 0.10 мкг/кг) | — | 0.0050 | 0.0250 |
Срок хранения растворов 6,-6? при температуре от 3 вС до 5 “С — не более 4 ч.
7 Отбор и подготовка проб
7.1 Отбор проб
7.1.1 Отбор проб рыбы и продукции из нее — по ГОСТ 31339.
7.1.2 Отобранные пробы при отсутствии возможности анализа в день отбора замораживают и хранят при температуре не выше минус 15 *С не более 90 сут.
7.2 Подготовка проб
7.2.1 Экстракция проб
Подготовка проб рыбы и продукции из нее — по ГОСТ 7636—85 (раздел 2). Анализируемую пробу мышечной ткани гомогенизируют, отбирают 0,5 г и помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3, далее обработку проб проводят по схеме (см. рисунок 1).
Рисунок 1 — Эктракция анализируемых проб
7.2.2 Очистка подготовленных проб методом твердофазной экстракции
Активируют и уравновешивают картридж для ТФЭ пропуская последовательно 2 см3 раствора, приготовленного по 6.2.4. 2 см3 метанола. 2 см3 деионизированной воды. Промывную фракцию от* брасывают. Наносят на картридж полученный экстракт (см. 7.2.1) и позволяют протечь без применения вакуума. Сорбент в картридже промывают 1.5 см3 раствора муравьиной кислоты, приготовленного по 6.2.3, сушат вакуумом. Элюируют анализируемые соединения в чистую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 с помощью 2 см3 раствора, приготовленного по 6.2.1. и концентрируют элюат до 0.5 см3 в токе азота при температуре не более 40 °C. Конечный объем элюата доводят до 1 см3 с помощью раствора, приготовленного по 6.2.2. Помещают пробирку с элюатом в ультразвуковую баню на 3 мин. перемешивают е шейкере вортексного типа в течение 3 с при 2500 об/мин и фильтруют в пробирку для автоматического устройства ввода проб вместимостью 2 см3 с помощью одноразовых фильтр-насадок. Очищенный экстракт в пробирке для автоматического устройства ввода проб используют для измерения методом ВЭЖХ-МС/МС.
8 Проведение измерений
8.1 Условия хроматографического разделения
8.1.1 Хроматограф с масс-слекгорометрическим детектором включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.
8.1.2 Для колонки диаметром 2.1 мм. длиной 50 мм. с обращенно-фазовым сорбентом с размером частиц 1.7 мкм. соблюдают следующие условия хроматографирования:
- температура колонки — 45 *С:
* скорость потока подвижной фазы — 0.3 см3/мин;
- объем вводимой пробы — 0,01 см3:
• температура в отсеке устройства ввода проб — 20 вС.
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление подвижных фаз А и Б по в.2.6) в соответствии с таблицей 2.
Таблица 2 — Условия хроматографического разделения
Время, мин | Подвижная фаза А. % | Подвижная <фам Б. % |
0.0 | 90 | 10 |
1.0 | 90 | 10 |
6.5 | 50 | 50 |
18.0 | 0 | 100 |
19.0 | 0 | 100 |
19.1 | 90 | 10 |
25.0 | 90 | 10 |
8.1.3 Параметры настройки масс-спектрометрического детектора:
* температура источника — 350 ’С;
- напряжение на калиляре — 1.0 кВ;
> напряжение в источнике (зона 1) — 400 В;
- напряжение в источнике (зона 2) — 300 В;
* давление азота в распылителе — 400 кПа;
* скорость газа осушения — 8 дм3/мин;
* температура газа осушения — 200 ’С;
* высокочастотное напряжение перед квадруполем — 400 В;
* амплитуда напряжения ВЧ — 400 В;
* амплитуда напряжения ВЧ охладителя ионов — 100/200 В. попеременно;
* время транспортирования ионов — 40/60 мкс. попеременно:
- время накопления ионов —16 мкс;
* скорость сканирования — 2 Гц.
8.1.4 Параметры работы масс-спектрометра в режиме MS/MS приведены в таблице 3.
Таблица 3
Аналит | Ион-лредшО' стоенмик. т/2 | Ион-продукты. mix | Время удержи* сани», мин | Энергия соударений. »В | Внутренний стандарт | |
Перфторбутансульфат | 298.941> | 168.972» | 98.932' | 5.2 | 40 | МЭ-перфторгексансульфат |
Перфтордодекансульфат | 698.921» | 168.972» | 98.932» | 12.0 | 40 | М8-перфтороктансульфат |
Перфтордекансульфат | 598.92’> | 168.972» | 98.9321 | 10.6 | 40 | М8-перфтороктансульфат |
Перфторсепгансульфаг | 448.931» | 168.972» | 98.932' | 8.1 | 40 | М8-лерфтороктансульфат |
Перфгоргексансульфат | 398.941» | 168.972» | 98.932» | 7J5 | 40 | МЗ-лерфторгексансульфзт |
Перфгорнонансульфат | 548.931» | 168.972» | 98.932) | 9.8 | 40 | М8-перфтороктансульфат |
Перфторо ктансульфат | 498.931» | 168.972» | 98.932' | 8.95 | 40 | М8-лерфтороктансульфат |
Перфгорлентансульфаг | 348.941» | 98.932» | 98.932' | 6.35 | 40 | МЗ-перфторгексансульфат |
Перфтордвканоаая кислота | 512.96 | 46В.972» | 446.971» | 9.32 | 8—10 | Мб-лерфтордекановая кислота |
Перфтордодвкановая кислота | 612.95 | 568.962> | 546.961* | 10.92 | 8—10 | М-перфтордодекановая кислота |
Окончание таблицы 3
Анапит | Ион-предшественник, mta | Ион-лродукты. m/z | Время удержи-мния. мин | Энергия соударений. эВ | Внутренний стандарт | |
Перфторгептановая кислота | 362.97 | 318.972' | 296.97” | 6,72 | 8—10 | М4-перфторгептановая кислота |
Перфторгексановая кислота | 312.97 | 268.9721 | 246.97” | 5.66 | 8—10 | М5-перфтортексановая кислота |
Пврфторгексадекановая кислота | 812.94 | 768,942' | 746.95” | 13.44 | 6—10 | М-лерфтордодекановая кислота |
Перфторнонановая кислота | 462.96 | 418.972' | 396.97” | 8.45 | 8—10 | М-лерфторнонановая кислота |
Перфтороктановая кислота | 412.97 | 368.9721 | 346,97” | 7.56 | 8—10 | М-лерфтороктановая кислота |
Перфторпентановая кислота | 262.97 | 218.982' | 196.97” | 4.25 | 8-10 | М5-перфторпентановая кислота |
Перфтортетрадекановая кислота | 712.95 | 663.982' | 646.96” | 12.3 | 8—10 | М-лерфтордодекановая кислота |
Перфтортридекановая кислота | 662.95 | 618.952' | 596.96” | 11,65 | 8—10 | М-лерфтордодекановая кислота |
Перфторундекановая кислота | 562.96 | 518.962» | 496.96” | 10,16 | 8—10 | М7-перфторундеканоеая кислота |
” При использовании каадрупольно-времяпролетных масс-анализаторов. 2> При использовании масс-анализаторов с тройным квадруполем. |
Примечание — Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектро-метрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.
8.1.5 Контроль чувствительности хроматографа с масс-слекторометрическим детектором осуществляют введением в инжектор хроматографа 0.01 см3 матричного градуировочного раствора G2. приготовленного по 6.3.4. Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.
8.2 Установление градуировочной характеристики
8.2.1 Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения.
8.2.2 Для установления градуировочной характеристики в инжектор хроматографа вводят по 0.01 см3 градуировочных растворов G.,—G7. приготовленных по 6.3.4 и 7.2 в условиях, указанных в 8.1.2.
8.2.3 При установлении градуировочной характеристики, в координатах «отношение площади пика определяемого вещества к площади пика внутреннего стандарта этого вещества» — «массовая концентрация определяемого вещества в градуировочном растворе», используют линейную регрессию. при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,98.
8.3 ВЭЖХ-МС/МС измерение
8.3.1 В инжектор хроматографа вводят 0,01 см3 пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7. проводят измерения в условиях, указанных в 8.1.
8.3.2 Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ионов-продуктов каждого аналита. соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов no 8.1.4.
8.3.3 При количественном определении ПФАК и ПФАС, рассчитывают отношения площадей пиков ионов-продуктов в анализируемом растворе и сравнивают их с отношениями площадей пиков ионов-продуктов а градуировочных растворах, отклонения не должны превышать значений, указанных в таблице 4.
Таблица 4 —Допустимые отклонения относительных ионных интенсивностей
Отношение площадей пиков номов-продуктов. % от основного пика | Максимально допустимые отклонения для ВЭЖХ-МС>МС детектирования. % |
Св. 50 | ±20 |
Св. 20 до 50 включ. | ±25 |
Св. 10 до 20 включ. | ±30 |
Менее 10 | ±50 |
9 Метрологические характеристики
Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания перфторированных алкилсульфатов и перфторированных алкилкарбоксилатов в рыбе и продукции из нее с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к = 2, указанной в таблице 5.
Таблица 5 — Показатели точности метода при проведении измерений содержания ПФАК и ПФАС
Аналит | Диале »м измерений содержание анал ига. ысгйг | Значение относительной расширенной неопределенности iUt при коэффициенте охвата к • 2. % | Показатель повторяемости (относительное средиеквадрати-ческое отклонение повторяемости) вг% | Показатель воспроизводи ы лети (относительное стандартное отклонение вое-прей ввод имеет и) | Предел повторяемости |
Перфторбугансульфат | От 0.10 до 1.00 включ. | 61 | 19 | 28 | 52 |
Св. 1.00 до 10,00 включ. | 36 | 11 | 17 | 30 | |
Перфгордодекамсуль-фат | От 0.50 до 10,00 включ. | 59 | 20 | 30 | 55 |
Перфтордекансульфат | От 0.10 до 1.00 включ. | 58 | 18 | 27 | 50 |
Св. 1.00 до 10.00 включ. | 38 | 12 | 18 | 33 | |
Перфторгэлтансульфат | От 0.50 до 10,00 включ. | 45 | 15 | 23 | 42 |
Перфгорсексансульфзт | От 0.10 до 1,00 включ. | 52 | 16 | 24 | 44 |
Св. 1.00 до 10.00 включ. | 35 | 11 | 17 | 30 | |
Перфторнонансульфат | От 0.10 др 1,00 включ. | 64 | 20 | 30 | 55 |
Св. 1.00 до 10.00 включ. | 45 | 14 | 21 | 39 | |
Перфторо ктансульфат | От 0.10 до 1,00 включ. | 57 | 18 | 27 | 50 |
Окончание таблицы 5
Аизпит | Диапазон измерений содержания аналита. мкг/кг | Значение относительной расширенной неопределенности аЦлри коэффициенте охвата * « 2.% | Показатель повторяемости (относительное среднеквадрати-чеосое отклонение повторяемости) О/-* | Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости} вд.% | Предел повторе* емости г. % |
Перфтороктансульфаг | Св. 1.00 до 10.00 включ. | 48 | 15 | 23 | 42 |
Перфторпентансульфат | От 0.10 до 1.00 включ. | 62 | 20 | 30 | 55 |
Св. 1.00 до 10.00 включ. | 41 | 13 | 20 | 36 | |
Перфтордекановая | От 1,00 до 10.00 включ. | 60 | 19 | 29 | 53 |
кислота | Св. 10.00 до 100.00 включ. | 31 | 15 | 23 | 42 |
Перфтордодекановая | От 1.00 до 10.00 включ. | 61 | 19 | 29 | 53 |
кислота | Св. 10,00 до 100.00 включ. | 40 | 13 | 20 | 36 |
Перфторгептановая | От 1.00 до 10.00 включ. | 58 | 18 | 27 | 50 |
кислота | Св. 10.00 до 100.00 включ. | 37 | 12 | 18 | 33 |
Перфторгекса новая кислота | От 5,00 до 100.00 включ. | 46 | 14 | 21 | 39 |
Перфторгексадекановая кислота | От 10.00 до 100.00 включ. | 47 | 15 | 23 | 42 |
Перфторнонановая | От 2,00 до 10.00 включ. | 52 | 16 | 24 | 44 |
кислота | Св. 10.00 до 100.00 включ. | 40 | 13 | 20 | 36 |
Перфтороктановая | От 1.00 до 10.00 включ. | 56 | 18 | 27 | 50 |
кислота | Св.10.00 до 100.00 включ. | 35 | 11 | 17 | 30 |
Перфторпентановая | От 2,00 до 20.00 включ. | 46 | 15 | 23 | 42 |
кислота | Св. 20.00 до 100.00 включ. | 33 | 11 | 16 | 30 |
Перфтор тот радекано-вая кислота | От 5,00 до 100,00 включ. | 42 | 13 | 20 | 36 |
Перфтор гридека новая кислота | От 2,00 до 100.00 включ. | 50 | 16 | 24 | 44 |
Перфторундекановая кислота | От 2.00 до 100.00 включ. | 45 | 14 | 21 | 39 |
10 Обработка результатов измерений
10.1 В соответствии сданными, полученными при анализе матричных градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения концентрации аналитов в анализируемой пробе.
10.2 За окончательный результат измерений содержания ПФАК и ПФАС принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости. округленное до второго десятичного знака и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).
11 Оформление результатов измерений
Содержание г-го аналита. мкг/кг, представляют в виде
XiiW Ui Xl. при *-2, (2)
где Х{ — среднеарифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания но аналита в анализируемой пробе (см. 10.2), мкг/кг:
Ц — значение относительной расширенной неопределенности содержания /-го аналита для соответствующего диапазона измерений. % (в соответствии с таблицей 5);
0,01 — коэффициент перевода значения относительной расширенной неопределенности в значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах.
12 Контроль качества результатов измерений
Контроль качества результатов измерений при реализации метода в лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-6—2003 (пункт 6.2.2) и показателя правильности по ГОСТ ИСО 5725-6—2003 (пункт 6.2.4). Проверку стабильности рекомендуется осуществлять с применением контрольных карт Шухарта по ГОСТ ИСО 5725-6—2003 (пункт 6.2.3). Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений устанавливают в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ ISO/IEC 17025.
УДК 639.38:614.31:006.354
МКС 67.120.30
Ключевые слова: продукция пищевая рыбная, полифторированные загрязнители, перфторированные алкилкарбоксилаты, перфторированные алкилсульфаты. метод, высокоэффективная жидкостная хроматография. масс-спектрометрическое детектирование
Редактор Н.В. Таланова Технический редактор И.Е. Черепкова Корректор И.А. Королева Компьютерная верстка П.А. Круговой
Сдано о набор 27.06.2021 Подписано в печать 20.09.2O2t. Формат 60*04%. Гарнитура Ариал. Усп. печ. л. 1.06. Уч.-иад. л. 1.00.
Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта
Соадано в единичном исполнении в ФГБУ кРСТ» . 117410 Москва. Нахимовский пр-т. д. 3t. я. 2. www.90slinfo.n1mfo@goslnfo.ru
1
В Российской Федерации действует ПОСТ Р ИСО 5725-6—2002.
2
Например, картриджи для твердофазной экстракции Waters Oasis WAX 60 mg 3 cc. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования других картриджей с аналогичными характеристиками.
3
Уникальный численный идентификатор химических соединений, полимеров, биологических последовательностей нуклеотидов или аминокислот, смесей и сплавов, внесенных е реестр Chemical Abstracts Service.